[发明专利]免疫测定产品和过程

说明书

本申请要求2011年5月11日提交的临时申请序号61/484,701的优先权，其公开内容通过引用结合到本文中。

技术领域

本文公开的实施例涉及用于检测和定位包含在印迹膜中的物质的设备和过程。更特别地，其涉及一种用于向印迹膜施加试剂、洗液和检测化学的技术，以经由真空或正压的使用而快速地实现此检测。

背景技术

凝胶电泳的使用当前是用于生物材料的分离的普遍技术。非生物材料也能够使用凝胶或其他色谱支持来分离，但是相对于生物制剂的努力范围更大。典型的应用包括序列确定背景下；多形态检测中；或者其他背景下的尺寸验证中的各种尺寸的核酸片段的分离。还频繁地执行的是蛋白质、糖蛋白、蛋白质片段的分离和凝胶分离作为均匀性或纯净度的验证、翻译后改性的识别和分子量确认的应用。

在所有这些程序中，生物实体的混合样本被施加于电泳凝胶，并且通过跨凝胶施加电场来分离各组分。无论用来使凝胶显影的方式如何，都必须以某种方式来检测结果产生的包含在样本中的物质的迁移的图案。

为了执行此检测，通常，使凝胶支撑体与印记膜接触，物质被以其出现在凝胶上的相同图案传输到该印记膜。然后至少通过用蛋白质或洗涤液阻断膜来检测“斑点”以减少非特定粘合（否则其将导致高水平的噪声和低水平的检测）。典型的阻断剂包括干酪素、牛血清白蛋白（BSA）、具有TWEEN?表面活性剂的缓血酸胺盐溶液（TBS-T溶液）中的脱脂奶粉（一般地约1-5%）或具有TWEEN?表面活性剂的磷酸盐缓冲盐溶液（PBS-T溶液）。然后用膜上的抗原所特定的抗体来培育生物实体。然后全面地洗涤膜以去除任何污染物、未结合阻断蛋白质或抗体等。然后用一级抗体所特定的二级酶、放射性同位素、氟（fluorfluor）或生物素偶联抗体来处理和培育膜。然后全面地洗涤膜以去除未结合二级抗体。然后，施加检测试剂，一般地为发色、化学发光、荧光、放射性或链亲和素标签材料，其结合到或者是酶偶联剂培养基。最后，使用适当的检测设备来确定生物实体的存在、不存在、位置、量等。最后六个步骤一般花费从3-6个小时至整夜，这取决于所选试剂、膜和生物实体之间的反应速度。该过程要求膜在摇动或其他适当的混合平台上的多个培育时段。其是大多数研究人员不喜欢的冗长过程且消耗（浪费）大量的试剂。

某些研究人员已经建议使用吸收剂材料的毛细管作用，诸如放置在膜下面的滤纸，以通过膜吸取剩余流体并改善该过程、尤其是洗涤步骤的速度。

US 5,155,049提到了一种由Hoefer Scientific Instruments公司销售的称为Hybrid-Ease?杂交室的系统。此室包括膜被夹在其之间的两个格栅。格栅板被卡合到围绕膜的位置，以及配合到由格栅产生的开放空间中的注射器。一个注射器被用来施加试剂和洗涤，并且另一个用来收回多余量。该系统要求大量的液体以便进行操作，采用起来是麻烦的，并且仍是相当耗时的。其还提到在某些特定试验中，诸如ELISA试验，在小体积阱中（诸如96孔微量滴定板）中，其他人已使用真空来在洗涤步骤中通过膜吸取液体。然而，这使其努力打折扣，因为其仅在小体积应用中可用且仍是不可控的。他们替代地建议更好的方法是使用在滤纸顶部和覆盖层上具有膜且然后压紧被夹在两个板之间的膜以挤压液体通过膜并进入纸中的手动压力机。

在2005年12月3日提交的USSN 60/732,994中，有人建议人们使用由多个层形成的设备，其包括在一层或多层印迹膜下面的多孔支撑层、在印迹膜上面的流量分配器和在流量分配器上以将液体包含在期望区域并允许此类液体的较低起始体积的阱。优选地，该流量分配器是非结合或低结合多孔膜。

在2006年10月18日提交的共同待审的美国序号11/582,727和11/582,599中，公开了一种设备，其中，保持流体导向器的保持器和多孔支撑体能够配合到歧管设备中以处理各种流体并检测生物实体。该歧管具有带有或没有阱的盖体和与保持器的中心开口成一直线的中心开口虽然有用，但其具有抑制其普遍使用和接受的限制。

很明显，需要一种用于检测印迹膜上的生物材料或实体的更高效方法。本文公开的实施例允许印迹膜中的生物实体的更有效和高效检测。

发明内容

根据某些实施例，提供了免疫检测系统和方法。该系统包括适合于与诸如真空的驱动力连通的歧管底座。该歧管保持载体，载体支撑印迹膜保持器。印迹膜保持器保持蛋白质能够经由电泳被结合到的印迹膜。该系统和方法使得用户能够快速且高效地使蛋白质印迹准备好用于检测，诸如通过化学发光。