[发明专利]病毒样颗粒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及佐剂和免疫调节剂的领域，并且特别地涉及病毒样颗粒(virus-like particle，VLP)及制备VLP的方法。

背景技术

以下专利和专利申请描述了番木瓜花叶病毒(papaya mosaic virus，PapMV)病毒样颗粒(VLP)增强抗原的免疫原性的能力。

美国专利No.7,641,896、加拿大专利申请No.2,434,000和国际专利申请No.PCT/CA03/00985(WO2004/004761)描述了PapMV或来源于PapMV外壳蛋白的VLP用于在动物中加强对抗原的免疫应答的用途。抗原可与PapMV或VLP连接或者它们可与PapMV或VLP组合施用。

国际专利申请No.PCT/CA2007/002069(WO2008/058396)描述了基于PapMV和PapMV VLP的流感疫苗。疫苗包含PapMV或PapMV VLP和一种或更多种流感抗原，所述抗原可与PapMV或VLP连接或者可与PapMV或VLP组合施用。

国际专利申请No.PCT/CA2007/001904(WO2008/058369)描述了基于PapMV的免疫原性亲和缀合抗原系统。该申请描述了PapMV外壳蛋白与能够结合目的抗原的多种亲和肽的融合体。

国际专利申请No.PCT/CA2008/000154(WO2008/089569)描述了基于PapMV的对抗伤寒沙门氏菌(S.typhi)和其他肠道菌病原体的疫苗。所述疫苗包含PapMV或PapMV VLP和一种或更多种肠道菌抗原，所述抗原可与PapMV或VLP连接，或者可与PapMV或VLP组合施用。

国际专利申请No.PCT/CA2009/00636(WO2010/012069)描述了包含PapMV成分和一种或更多种抗原的多价疫苗，及其提供对抗多种病原体株或对抗多于一种病原体的保护的用途。所述疫苗可任选地包含沙门氏菌属(Salmonella spp.)孔蛋白成分。

已描述了由经分离的PapMV外壳蛋白制备PapMV VLP。Erickson和Bancroft(1978，Virology,90：36-46&1978，Virology，90：47-53)首先描述了通过体外自组装经分离的PapMV外壳蛋白和PapMV RNA来制备PapMV VLP。用于这些实验的PapMV外壳蛋白制备物分离自PapMV并且以蛋白质的聚合形式为主(在3S、14S和25S沉积)，其中的一种或更多种被认为是对于引发VLP形成必不可少的。Sit等(1994，Virology，199：238-242)的后续研究确立了引发组装需要PapMV基因组的前38至47个核苷酸，并且提出了引发复合也需要14S聚合物种类(species)。

后来，证明了PapMV VLP可由在大肠杆菌中表达的PapMV外壳蛋白的单体形式来制备。重组外壳蛋白在细菌细胞中自组装，并且可通过使细胞破裂，然后进行几步纯化步骤(包括去污剂处理)来分离VLP(参见Tremblay等.2006，FEBS J.，273：14-25；国际专利申请No.PCT/CA2007/002069(WO2008/058396)、PCT/CA2007/001904(WO2008/058369)、PCT/CA2008/000154(WO2008/089569)和PCT/CA2009/00636(WO2010/012069))。

提供该背景信息的目的是为了告知本申请人认为的可与本发明相关的信息。既未必旨在承认也不应解释为任何以上信息构成针对本发明的现有技术。

发明内容

本发明的一个目的是提供番木瓜花叶病毒样颗粒及用于制备所述病毒样颗粒的方法。根据本发明的一个方面，提供了用于制备病毒样颗粒(VLP)的体外方法，其包括以下步骤：a)在约6.0至约9.0的pH下和约2℃至约37℃的温度下，将蛋白质：RNA比按重量计为约1：1至50：1的重组马铃薯x病毒(potexvirus)外壳蛋白与ssRNA组合足以允许VLP组装的时间；b)用核酸酶处理VLP以移除从颗粒中突出的任何RNA；以及c)将VLP与其他处理成分分离。

根据另一个方面，提供了通过根据本发明之方法制备的病毒样颗粒(VLP)。

根据另一个方面，提供了包含通过根据本发明之方法制备的VLP的药物组合物。

根据另一个方面，提供了通过根据本发明之方法制备的VLP，其用作佐剂。