[发明专利]诊断类风湿性关节炎的方法

说明书

发明领域

本发明涉及用于诊断类风湿性关节炎(RA)的瓜氨酸合成肽的应用。特别地，本发明涉及与RA患者的血清中存在的自身抗体特异性反应的肽序列的应用。

当前技术水平

类风湿关节炎(RA)在广泛的炎性关节疾病中占有突出位置。通过在小关节和大关节中产生系统性和破坏性炎症，RA导致疼痛和关节衰竭，最终导致畸形和残疾。RA的特点是出现多种自身抗体。最为人熟知的RA生物标志物是针对免疫球蛋白IgG同种型Fc区的IgG、IgA或IgM类抗体：类风湿因子(RF)。约70～80%的RA患者为RF血清阳性，但在慢性感染、淋巴增殖性疾病、其它类风湿疾病和近20%的老年健康个体中也发现了RF。因此，鉴于RF对RA的特异性有限，人们探寻了其它更具特异性的抗体。APF(抗核周因子)抗体和AKA(抗角蛋白抗体)明确显示具有高度疾病特异性。

后来发现由APF抗体和AKA识别的抗原是通过将精氨酸修饰成瓜氨酸残基在翻译后生成的含有瓜氨酸的蛋白质。RA中含有瓜氨酸表位的这一发现加速了对该高度特异性RA生物标志物的鉴定。抗瓜氨酸蛋白/肽抗体(ACPA)是几乎专一存在于RA中的生物标志物家族[G.J.Pruijn等.Arthritis Res.Ther.2010,12,203]。因为具有高疾病特异性，最近ACPA被包括在了用于RA的分类和诊断的血清学标准中[D.Aletaha等.Ann.Rheum.Dis.2010,69,1580]。已经使用不同的瓜氨酸肽和蛋白质来设立识别ACPA的特异且灵敏的RA诊断试验[US20020143143、US20070087380、EP1946109、US20070148704、WO2009007846、WO2009000077、WO2007017556、EP1456662、WO1999028344、WO2008132264、WO2010115745、WO2010117694、US2011065609]。在与RA相关联的所有蛋白质中，以下瓜氨酸序列已被用于诊断试验：血纤蛋白[C.Masson-Bessière等.J.Immunol.2001,166,4177]、胶原蛋白II[H.Burkhardt等.Eur.J.Immunol.2005,35,1643]、波形蛋白[E.R.Vossenaar等.Arthritis Rheum.2004,50,3485]、丝聚蛋白[US20090028885、US7445903、US6890720]，以及病毒蛋白[C.Anzilotti等.J.Rheumatol.2006,33,647；WO2004087747]。首个使用合成瓜氨酸肽(CP)的ELISA源自丝聚蛋白[G.A.Schellekens等.J.Clin.Invest.1998,101,273]。为了增加所述测试的灵敏度，将CP修饰成环瓜氨酸肽(CCP)的结构，其中，优选暴露所述化氨酸部分以供抗体结合[WO1998022503]。在所谓的CCP1测试中[G.A.Schellekens等.Arthritis Rheum.2000,43,155]，可在68%的RA患者血清中检测到抗体，采用单一CCP的特异度为98%。近期研究表明，第二代CCP测试，CCP2[J.Avouac等.Ann.Rheum.Dis.2006,65,845]，是非常灵敏且特异的，其显示68%(39～94%范围)的灵敏度和95%(81～100%范围)的特异度。最近，INOVA开发出了第三代试验[L.Lutteri等.Clin.Chim.Acta2007,386,76]并宣称该试验是新型且更灵敏的抗CCP ELISA，其保持98%的特异度。这些ELISA测试全部市售可得(荷兰阿纳姆的ED公司(Euro-Diagnostica)；苏格兰敦提的轴盾公司(Axis-Shield)；美国圣地亚哥的INOVA公司)。