[发明专利]聚烯杀真菌剂和非核糖体肽的协同组合和相关的使用方法

说明书

发明领域

本发明涉及聚烯杀真菌剂与抗生素非核糖体肽如两亲性环脂肽的协同组合，以改善两种组分的杀真菌活性。

发明背景

杀真菌剂有许多用途，包括用于作物保护；作为食品、饲料和化妆品防腐剂；和应用于人和兽的药物。作物减产、经食物传播的疾病、以及人和动物的真菌感染成为发达和发展中国家共同的问题。因此，改善现有杀真菌剂（尤其是环保且对真菌耐受性发展不敏感的杀真菌剂）的效力是非常期待的。

聚烯杀真菌剂为已经在前述领域中应用的抗真菌抗生素。它们的获得可通过发酵链霉菌属物种，如纳塔尔链霉菌（Streptomyces natalensis），其通常见于土壤中。聚烯杀真菌剂的活性可部分从它们通过与麦角固醇形成复合物而损伤细胞膜的能力推导出。大量的研究已经证实真菌对那他霉素的耐受性发展潜力非常低。另外，聚烯杀真菌剂具有可忽略的毒性，因为它们不影响哺乳动物细胞内存在的胆固醇。

非核糖体肽，包括环状两亲性脂肽如表面活性素类、伊枯草菌素类和芬枯草菌素类（fengycins），其抗微生物性能是公认的并已经应用于作物保护领域。由于它们的作用方式，它们还在生物制药及其它生物技术应用中有潜在用途。脂肽可通过各种土壤细菌的发酵获得，包括枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。脂肽，与聚烯杀真菌剂类似，通过破坏细胞膜杀死真菌。可以预见真菌对这些化合物的耐受性发展潜力非常低，因为它们直接作用于膜脂而不是直接作用于单点蛋白靶标。另外，脂肽对环境无害且对工人和消费者的危险低；事实上，用含有芽孢杆菌属（Bacillus）菌株处理的作物可在处理的当天收获。申请人已经发现聚烯杀真菌剂和脂肽的组合会导致在抗微生物如真菌的效力上协同增强，而不仅仅是累加增强。不希望受任何理论的束缚，申请人假设本发明的脂肽和聚烯杀真菌剂以协同杀真菌的方式起作用，因为每种类型的化合物通过不同的作用方式破坏真菌的细胞膜。

发明概述

本发明提供一种低毒、低耐受性诱导、增效的杀真菌组合物，其包含比许多传统合成杀真菌剂毒性小且以比各个化合物的施用率低的组分。该杀真菌组合物包含一种或多种聚烯杀真菌剂和至少一种脂肽的协同杀真菌组合。在一实施方案中，聚烯杀真菌剂为下列中的一种或多种：那他霉素（natamycin）、制霉菌素（nystatin）、两性霉素B、金色制霉素、非律平和光明霉素（lucenosomycin）和/或每种这些聚烯杀真菌剂的衍生物。在另一实施方案中，所述组合物包含一种以上的聚烯杀真菌剂。

该协同杀真菌组合中的脂肽组分可以是产脂肽微生物产生的发酵产物的一部分，可以是此种杀真菌的发酵产物的粗提取物，或者可以是由此种发酵产物纯化或半纯化。在其它实施方案中所述脂肽是合成或半合成的（即，母体脂肽由微生物获得和衍生而来）。在一些实施方案中，产脂肽的微生物为芽孢杆菌属物种细菌。在其它实施方案中其为链霉菌。在还有的其它实施方案中其为类芽孢杆菌属（Paenibacillus）物种细菌。

在具体的实例中，产脂肽的细菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）或产一种或多种脂肽的任何其它芽孢杆菌属物种。在又一实例中，由这样的芽孢杆菌属物种生产的脂肽选自下列族中的一种或多种：表面活性素型化合物、伊枯草菌素型化合物和芬枯草菌素型化合物。一些产生脂肽的芽孢杆菌属物种描述于发明详述中（例如，解淀粉芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌（cereus）、苏云金芽孢杆菌（thuringiensis）、凝结芽孢杆菌（coagulans）、短小芽孢杆菌（pumilus）、地衣芽孢杆菌（licheniformis））；其它将是本领域的技术人员已知的。在具体的实例中，产脂肽的细菌为枯草芽孢杆菌QST713。在一实施方案中，组合物包含聚烯杀真菌剂组分和含脂肽的发酵产物。在一实例中含脂肽的发酵产物得自芽孢杆菌属物种细菌，如上面提及的那些。