[发明专利]用于在真核生物中调控基因表达或检测和控制DNA座位的构建体和方法

权利要求书

1.一种真核表达载体，包括编码融合蛋白的核苷酸序列，所述融合蛋白包括对应于属于细菌DNA分离系统的DNA结合蛋白或其衍生物或片段的第一多肽，且该结合不需要任何其它因子。

2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述属于细菌DNA分离系统的DNA结合蛋白是来源于洋葱伯克氏细菌的ParB蛋白。

3.根据权利要求1或2所述的载体，其特征在于，所述属于细菌DNA分离系统的DNA结合蛋白选自：

由Bcc的染色体1编码的被定名为ParB-c1的ParB蛋白，诸如在NCBI基因组测序计划中的N YP-002229191下获取的Bcc菌株J2315的蛋白；

由Bcc的染色体2编码的被定名为ParB-c2且对应于所附序列表中的SEQ ID NO:2蛋白的ParB蛋白，诸如在NCBI基因组测序计划中的N YP-002232636下获取的Bcc菌株J2315的蛋白；

由Bcc的染色体3编码的被定名为ParB-c3且对应于所附序列表中的SEQ ID NO:4蛋白的ParB蛋白，诸如在NCBI基因组测序计划中的N YP-002153395下获取的Bcc菌株J2315的蛋白；

由Bcc的质粒编码的被定名为ParB-p1的ParB蛋白，诸如在NCBI基因组测序计划中的N YP-002235439下获取的Bcc菌株J2315的pBCJ2315质粒的蛋白；

及它们的衍生物或片段。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的载体，其特征在于，所述融合蛋白包括第二多肽，所述第二多肽是容易检测到的多肽或参与基因表达调控的多肽。

5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，所述容易检测到的多肽是：

在特定条件下，诸如当适合的底物存在下被放置时，能够产生可检测到的、可选可计量的信号的酶；或者

生物发光或荧光的多肽。

6.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，所述参与基因表达调控的多肽选自：正转录因子或负转录因子、常规转录因子、启动子的表达调控因子、染色质重构因子和修饰相邻基因的位置的因子，及它们的衍生物或片段。

7.根据前述权利要求中任一项所述的载体，其特征在于，所述载体包括操作性连接的：真核类型的启动子、编码融合蛋白的核苷酸序列及包括剪切位点和/或polyA信号的真核生物转录终止信号。

8.一种融合蛋白，包括：

对应于属于细菌DNA分离系统的DNA结合蛋白或其衍生物或片段的第一多肽，且该结合不需要任何其它因子；以及

参与基因表达调控的第二多肽。

9.一种融合蛋白，包括：

对应于来源于洋葱伯克氏细菌的ParB蛋白或其衍生物或片段的第一多肽；以及

容易检测到的第二多肽。

10.一种分离的多聚核苷酸，选自以下不同的多聚核苷酸：

i）编码如权利要求8或9中限定的融合蛋白的多聚核苷酸；

ii）与在第i）条中限定的所述多聚核苷酸互补的多聚核苷酸；

iii）具有能够在高严格性条件下与在第i）条和第ii）条中限定的多聚核苷酸杂交的至少14个核苷酸且特别是具有至少18个核苷酸的多聚核苷酸。

11.一种真核载体，包括核苷酸序列及真核类型的可选择的标记物，该核苷酸序列具有至少一个被属于细菌DNA的分离系统的DNA结合蛋白识别的识别位点。

12.根据权利要求11所述的载体，所述载体是整合型的。