[发明专利]用于从微藻提取角鲨烯的方法

说明书

本发明涉及用于不使用有机溶剂提取通过使属于破囊壶菌目物种家族的微藻发酵而产生的角鲨烯的方法，其特征在于它包括以下步骤：1)制备属于破囊壶菌目家族的微藻的生物质以降低间质可溶物质的浓度，并且因此获得30%至99%的纯度，表述为相比发酵介质总干重的生物质干重；2)使用选自中性或碱性蛋白酶的组的蛋白酶处理产生的生物质以破坏所述微藻的细胞壁同时阻止由所述酶处理产生的乳液形成；3)离心所产生的反应混合物以将油与水相分离；以及4)回收由此产生的富集角鲨烯的粗制油。

本发明涉及在不存在有机溶剂下，从破囊壶菌属家族的微藻最优化提取角鲨烯的方法。

对于本发明的目的，表述“破囊壶菌目物种家族的微藻”意在是指属于裂殖壶菌属、Aurantiochytrium sp.和破囊壶菌属物种的微藻。

角鲨烯是一种三萜，包括30个碳原子和50个氢原子的类异戊二烯，化学式为：2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯。

这是一类由所有高等生物，包括在人类（在皮脂中发现）中自然产生的脂类。角鲨烯事实上是在胆固醇、类固醇激素和维生素D生物合成中一种必需中间体（一种胆固醇代谢途径的酶，角鲨烯单加氧酶，通过氧化角鲨烯分子的一个末端将诱导其环化作用并产生羊毛脂甾醇，后者将转变为胆固醇或其他类固醇）。

在工业上，角鲨烯特别地应用于食品部门、化妆品领域和制药领域。

作为食品增补剂，角鲨烯通常被配制为胶囊剂或油类。

在化妆品领域，这一分子可以被用作保湿霜中的抗氧化剂、抗静电剂和软化剂，迅速渗透皮肤而不留下脂肪痕迹或感觉，并且与其他油类和维生素混合良好。

在这个领域应当注意的是，考虑到角鲨烯极不稳定性（6不饱和的），它是饱和形式角鲨烷（通过氢化作用获得），与角鲨烯相比是更好的抗氧化剂，角鲨烷在市场上可以找到，通常来讲有非常高的纯度（99%）。

毒理学研究表明，按照在化妆品中使用的浓度，角鲨烯和角鲨烷并不显示任何毒性并且对人类皮肤无刺激、不致敏。

在制药领域中，角鲨烯被用作疫苗的佐剂。

这些佐剂是刺激免疫系统并增加对疫苗相应的物质。

角鲨烯的纯度水平在应用领域是必要的。

事实上，如果口服，角鲨烯被认为是完全安全的，但是注射途径是争论的主题。

事实上，在医学领域，在角鲨烯被杂质污染的情况下会增加人类受试者伤害的风险，因为根据定义，这一佐剂也可以因其自身杂质诱导一种强烈的免疫反应。

因此必须获得高质量、无杂质的角鲨烯（杂质是指痕量金属，尤其是指汞和其他毒素）。

文献中提出了几种生产和提取角鲨烯的途径。

它是通常在软骨鱼类的肝脏中发现贮藏的一种化合物，例如深海鲨鱼（角鲨烯因此得名）。

因此这就是它们被过度捕捞的原因之一，鲨鱼已经因其鳍而被捕杀。鲨鱼肝脏因此被出售以生产被誉为“有益健康”的胶囊。

然而，即使出售的角鲨烯主要从鲨鱼肝脏中提取，也不能排除健康问题。

这是因为鲨鱼可以感染病原体，这些病原体可以产生对人类有害的物质。此外，鲨鱼肝脏（生物体的消除和净化器官）可以包含对人类有害的毒素，例如carchatoxin。

这些令人担忧的环境问题（鲨鱼数量的大量减少）和令人担忧的健康问题（鱼肝也贮藏令人担忧的有关健康的毒素），促使人们从植物中提取角鲨烯。

因此将它从橄榄油、棕榈油进行提取，以及在来自谷类或源自苋属植物、种子、米糠或小麦胚芽的油中进行分离是可能的。