[发明专利]在单分子水平上在细胞环境中分析蛋白-蛋白相互作用的方法和装置

权利要求书

1.一种在单分子水平上分析蛋白相互作用的方法，包括：

（a）将第一蛋白结合在基片上，其中，所述第一蛋白是用第一标记物标记的，所述第一标记物与固定在所述基片上的生物分子特异性结合；

（b）使用含有用第二标记物标记的第二蛋白的细胞溶胞产物孵育与所述基片结合的第一蛋白；

（c）在细胞溶胞产物中，分析所述第一蛋白和第二蛋白之间的相互作用。

2.一种在单分子水平上分析蛋白的方法，包括：

（a）将第一蛋白结合在基片上，其中，所述第一蛋白与固定在所述基片上的生物分子特异性结合；

（b）使用含有用第二标记物标记的第二蛋白的细胞溶胞产物孵育与所述基片结合的第一蛋白；

（c）在细胞溶胞产物中，分析所述第一蛋白和第二蛋白的相互作用。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，步骤（c）包括当第二蛋白与第一蛋白结合时，使用生成近场的光学设备测量由标记第二蛋白的第二标记物所产生的具有特定波长的荧光信号。

4.如权利要求3所述的方法，在步骤（c）中，其中，所述具有所述特定波长的荧光信号是在预定的时段内累加测量的。

5.如权利要求3所述的方法，在步骤（c）中，其中，所述具有所述特定波长的荧光信号是在提供给所述基片的细胞溶胞产物中实时测量的。

6.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述步骤（a）包括孵育包含所述第一蛋白的细胞溶胞产物。

7.如权利要求6所述的方法，还包括在所述步骤（b）之前将所述基片用一种缓冲液孵育。

8.如权利要求1所述的方法，其中，所述第一标记物和第二标记物是具有不同波长的荧光蛋白。

9.一种在单分子水平上分析第一蛋白和第二蛋白之间的相互作用的方法，包括：

（a）将第一蛋白结合在基片上，其中，所述第一蛋白是用第一标记物标记的，所述第一标记物与固定在所述基片上的生物分子特异性结合；

（b）使用含有用第二标记物标记的第二蛋白的细胞溶胞产物孵育与所述基片结合的第一蛋白；

（c）分析在细胞溶胞产物中，所述第一蛋白和所述第二蛋白之间的相互作用，并且获得表示所述相互作用的动态图像的第一分析值；

（d）使用含有来自步骤（b）的细胞溶胞产物和具有其他蛋白的另一种细胞溶胞产物的细胞溶胞产物混合物孵育来自步骤（a）的与所述基片结合的第一蛋白；

（e）在来自所述细胞溶胞产物混合物的其他蛋白存在的条件下，分析所述第一蛋白和所述第二蛋白之间的相互作用，并且获得表示所述相互作用的动态图像的第二分析值；和

（f）比较和分析所述第一和第二分析值。

10.一种在单分子水平上分析第一蛋白和第二蛋白之间的相互作用的方法，包括：

（a）将第一蛋白结合在基片上，其中，所述第一蛋白与固定在所述基片上的生物分子特异性结合；

（b）使用含有用第二标记物标记的第二蛋白的细胞溶胞产物孵育与所述基片结合的第一蛋白；

（c）分析在细胞溶胞产物中，第一蛋白和第二蛋白之间的相互作用，并且获得表示所述相互作用的动态图像的第一分析值；

（d）使用含有来自步骤（b）的细胞溶胞产物和具有其他蛋白的另一种细胞溶胞产物的细胞溶胞产物混合物孵育来自步骤（a）的与所述基片结合的第一蛋白；

（e）在来自所述细胞溶胞产物混合物的其他蛋白存在的条件下分析所述第一蛋白和所述第二蛋白之间的相互作用，并且获得表示所述相互作用的动态图像的第二分析值；和

（f）比较和分析所述第一和第二分析值。

11.如权利要求9或10所述的方法，其中，步骤（c）包括当第二蛋白与第一蛋白结合时，使用生成近场的光学设备测量由标记所述第二蛋白的第二标记物所产生的具有特定波长的荧光信号。

12.如权利要求11所述的方法，其中，在步骤（c）中，所述具有特定波长的荧光信号是在预定时段内累加测量的。

13.如权利要求11所述的方法，其中，在步骤（c）中，所述具特定波长的荧光信号是在提供给所述基片的细胞溶胞产物存在的条件下实时测量的。

14.如权利要求9或10所述的方法，其中，所述步骤（a）包括培养所述包含第一蛋白的细胞溶胞产物。