[发明专利]具有降低的非特异性活性的Sso7-聚合酶缀合物

权利要求书

1.一种Sso7聚合酶缀合蛋白，其包含与聚合酶连接的Sso7结构域；其中：

所述Sso7结构域与SEQ ID NO：2的K28对应的氨基酸不是赖氨酸(K)；和／或

所述Sso7结构域与SEQ ID NO：2的R43对应的氨基酸不是精氨酸(R)，

其中所述缀合蛋白与其它方面相同的对照缀合蛋白相比具有降低的非特异性扩增活性，在所述对照缀合蛋白中，所述Sso7结构域与SEQ ID NO：2的K28对应的氨基酸是赖氨酸(K)，且所述Sso7结构域与SEQ ID NO：2的R43对应的氨基酸是精氨酸(R)。

2.根据权利要求1所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中与对照缀合蛋白的非特异性扩增活性相比，所述Sso7聚合酶缀合蛋白的非特异性扩增活性降低至少10％。

3.根据权利要求1所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述Sso7结构域与SEQ ID NO：2的K28对应的氨基酸不是赖氨酸(K)。

4.根据权利要求3所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述Sso7结构域与SEQ ID NO：2的K28对应的氨基酸选自由以下各项组成的组：丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、胞嘧啶(C)、脯氨酸(P)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、苯丙氨酸(F)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、精氨酸(R)、缬氨酸(V)、色氨酸(W)和酪氨酸(Y)。

5.根据权利要求1所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述Sso7结构域与SEQ ID NO：2的R43对应的氨基酸不是精氨酸(R)。

6.根据权利要求5所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述Sso7结构域与SEQ ID NO：2的R43对应的氨基酸选自由以下各项组成的组：丙氨酸(A)、胞嘧啶(C)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、苯丙氨酸(F)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、异亮氨酸(I)、赖氨酸(K)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、缬氨酸(V)、色氨酸(W)、酪氨酸(Y)和脯氨酸(P)。

7.根据权利要求1所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述聚合酶基本上没有3’-5’外切核酸酶活性。

8.根据权利要求1所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述Sso7结构域与SEQ ID NO：2的前58或60个氨基酸或与SEQ ID NO：2的全长基本(例如，至少60、75、80、85、90或95％)相同。

9.根据权利要求1所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述Sso7结构域与SEQ ID NO：2至少90％相同。

10.根据权利要求1所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述聚合酶与SEQ ID NO：33或SEQ ID NO：61基本(例如，至少60、75、80、85、90或95％)相同。

11.根据权利要求10所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述聚合酶包含SEQ ID NO：33或SEQ ID NO：61。

12.根据权利要求1所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述聚合酶结构域具有热稳定的聚合酶活性。

13.根据权利要求12所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述聚合酶结构域是家族A聚合酶结构域。

14.根据权利要求13所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述聚合酶结构域是ΔTaq聚合酶结构域。

15.根据权利要求12所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述聚合酶结构域是家族B聚合酶结构域。

16.根据权利要求15所述的Sso7聚合酶缀合蛋白，其中所述聚合酶结构域来自热球菌属(Pyrococcus)。

17.一种反应混合物，其包含权利要求1-16中任一项所述的Sso7聚合酶缀合蛋白。

18.根据权利要求17所述的反应混合物，所述反应混合物进一步包含至少一种或多种寡核苷酸引物、一种或多种可检测地标记的寡核苷酸探针、缓冲液、核苷三磷酸、盐、DNA结合染料、或稳定剂。