[发明专利]用于检测和定量组织中的靶分子的方法

权利要求书

1.用于定量至少一种组织中的至少一种靶分子的方法，所述方法包括下列步骤：

a）分析组织切片，以便获得代表所述切片中靶分子的量的信号；

b）使用用于所述组织的标准分子的稀释范围来确定所述组织中靶分子的量，所述稀释范围按照下列步骤获得：

（i）对与必须应用检测和定量方法的组织相一致的组织进行研磨，以获得组织匀浆物；

（ii）将所述标准分子与来自于步骤（i）的第一组织匀浆物样品混合，所述标准分子具有第一已知浓度；

（iii）调制从步骤（ii）获得的第一组织匀浆物样品，以便能够对所述组织匀浆物样品进行切片；

（iv）使用来自于步骤（i）的至少一个第二组织匀浆物样品和与第一浓度不同的第二已知浓度的标准分子，重复步骤（ii）和（iii）；

（v）分析从步骤（iii）获得的每个调制过的组织匀浆物样品的至少一个切片，以便为所述样品分子的每种浓度，获得代表所述组织中标准分子的量的信号。

2.权利要求1的定量方法，其中调制组织匀浆物样品的步骤（iii），由对所述组织匀浆物样品进行冷冻和/或包被构成。

3.权利要求1和2之一的定量方法，其中分析步骤（v）由经质谱术分析或经荧光分析或经放射自显影术分析构成。

4.权利要求1至3之一的定量方法，其还包括下面的步骤：

（vi）在调制步骤（iii）之前，对来自于步骤（ii）的组织匀浆物样品和标准分子进行均质化。

5.权利要求1至5之一的定量方法，其中从步骤（iii）获得的组织匀浆物样品表现出与相应的完整组织相一致的密度和/或组织消光系数。

6.前述权利要求之一的定量方法，其中对所述组织中至少两种不同的靶分子同时进行检测和定量，对于制备标准范围的步骤（ii）来说，使用至少两种不同的标准分子产生每种靶分子的标准范围，所述至少两种不同的标准分子添加到每个组织匀浆物样品中；对每种标准分子进行步骤（v）的分析，以便为每种浓度获得代表所述组织中每种标准分子的量的信号；并且对于每种靶分子，使用相应的稀释范围来进行确定靶分子的量的步骤b）。

7.前述权利要求之一的定量方法，其中对至少两种不同组织进行分析，对每种组织进行制备标准范围的步骤（i）至（v），以便为每种组织获得代表所述标准分子的信号，对于每种组织，使用相应的稀释范围进行确定靶分子的量的步骤b）。

8.前述权利要求之一的定量方法，其中所述靶分子是蛋白质、肽、多肽、氨基酸、核酸、脂类、药物、药学活性分子或生物活性分子或代谢物。

9.前述权利要求之一的定量方法，其中被分析的组织是动物生物组织或植物生物组织。

10.前述权利要求之一的定量方法，其中步骤a）由经质谱术分析构成，与所述靶分子的质谱相关的信号对应于所述质谱的峰强度、峰面积或信噪比。

11.前述权利要求之一的定量方法，其中用于制备所述稀释范围的标准分子对应于所述靶分子。

12.前述权利要求之一的定量方法，其中使用质谱成像，来自于所述靶分子的信号强度能够同时使述靶分子在所述组织切片中的分布和浓度可视化。

13.前述权利要求之一的定量方法，其中在完整动物的切片上直接检测和定量所述靶分子，以便利用每种组织特异性的稀释范围同时比较所述靶分子在所述动物的不同组织中的分布。

14.用于从组织切片检测和/或定量所述组织中的至少一种靶分子的方法的验证方法，所述验证方法包括下列步骤：

（x）对与必须应用检测和/或定量方法的组织相一致的组织进行研磨，以获得组织匀浆物；

（xi）将标准分子与来自于步骤（x）的至少两个组织匀浆物样品混合，对于所述至少两个组织匀浆物样品来说，所述标准分子具有相同的已知浓度；

（xii）调制从步骤（xi）获得的组织匀浆物样品，以便能够对所述组织匀浆物样品进行切片；

（xiii）分析从步骤（xii）获得的每个组织匀浆物样品的至少一个切片，以便为每个切片获得代表所述组织中的标准分子的信号；

（xiv）将从每个切片获得的信号进行相互比较。