[发明专利]利用杂交和增强解离的高精度基因组学分析平台的方法及装置

权利要求书

1.一种捕捉/浓缩测试样品中所关注的靶多核苷酸序列、检测其是否存在、测定其数量或对其进行验证的方法，包括以下步骤：

a）在分析介质中混合下述物质形成反应混合物：

(i)含有结合至固体颗粒上的第一探针的第一试剂，所述第一探针包括与靶核苷酸序列的所选链段的两个独立链段中的第一个链段互补的第一单链核酸片段，其中，所述固体颗粒为带有正电荷的固体颗粒；以及

(ii)可能含有靶核苷酸序列的测试样品的等分试样，其中，所述第一探针与靶多核苷酸序列的相互排斥部分互补；

b)对所述反应混合物施行变性条件，使得样品中的靶多核苷酸序列变成单链；

c)将所述反应混合物在杂交条件下进行温育，以使第一探针和靶多核苷酸序列的所选链段的第一链之间发生杂交；

从而，在靶多核苷酸的存在下，几乎所有的第一探针都杂交到靶多核苷酸序列的所选链段的第一链上，形成结合的靶多核苷酸序列；

d)将所述反应混合物暴露于解离条件下；并且

e)监控所述反应混合物，其中解离与在结合的靶多核苷酸的存在下的变化相关，提供解离曲线分析；

从而，带正电荷的固体颗粒在一定程度上增强了用于分析的热解特性，使其可检测，量化或区分靶多核苷酸和第一探针的核酸杂交体的细微序列差异，其中，所述细微序列差异可小至一个碱基对。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述靶多核苷酸为DNA片段。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述靶多核苷酸为RNA片段。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述第一探针为DNA或RNA片段。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述第一探针通过接头结合至固体颗粒上。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述固体颗粒选自聚苯乙烯、微珠、玻璃、金属、炭、胶体金、膨润土、聚丙烯、塑料和二氧化硅。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述固体颗粒为玻璃。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述固体颗粒为载玻片。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述带正电荷的固体颗粒包括带正电荷化学品的表面涂层。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述带正电荷化学品选自聚乙烯亚胺、环氧化物、胺和其它任何带有正电荷的化学品。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述带正电荷化学品为聚乙烯亚胺。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于：所述聚乙烯亚胺以约1%至约10%的量存在。

13.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述载玻片为微阵列载玻片。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于：所述微阵列载玻片含有约10个至约420万个探针。

15.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述靶多核苷酸序列包括一标记物。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于：所述标记物为选自2-（（碘代乙酰基）氨基）乙基）氨基亚萘基-1-磺酸）（1,5-IEDANS）、荧光素、氟硼荧、FTC、德克萨斯红、藻红素、罗丹明、羧基四甲基罗丹明、DAPI、indopyras染料、Cascade蓝、俄勒冈绿、曙红、赤藓红、吡啶恶唑、苯并恶二唑、氨基萘、芘、马来酰亚胺、香豆素、荧光黄、碘化丙啶、卟啉、CY3、CY5、CY9、镧系元素、穴状化学品和镧系元素螯合物的荧光染料。

17.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述将反应混合物暴露于解离条件下的步骤在温度为约0℃至约100℃下进行。

18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于：所述将反应混合物暴露于解离条件下的步骤中，温度以0.01℃至约5.0℃的增量升高。

19.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：形成、施行、温育、暴露和监控步骤，以一自动化的微阵列装置进行。