[发明专利]用于酶介导的信号放大的方法

权利要求书

1.一种用于检测样本中的固定化靶标的方法，其中所述靶标固有地包括氧化还原酶酶促活性或与氧化还原酶酶促活性相连，所述方法包括在水溶液中孵育假定包括所述靶标的样本，所述水溶液包括

（i）所述酶促活性的第一底物，以及

（ii）所述酶促活性的第二底物，

2.其中所述第一底物是α-氰基-4-羟基肉桂酸（ACHCA）或其衍生物，所述第二底物是包括一种或多种能够作为所述酶促活性的底物的化合物以及可检测标记物的结合物分子。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述氧化还原酶酶促活性与选自酚氧化酶或过氧化物酶的酶相关联。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述酶是过氧化物酶。

5.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述水溶液包括过氧化物化合物。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中所述第二底物是式（i）的结合物分子：

(Y)n-L-(Z)m，

其中

Y是能够作为具有氧化还原酶活性的酶的底物的化合物；

Z是可检测标记物；

L是连接物化合物或化学键，

其中

n是1～150的整数，且

m是1～150的整数。

7.根据权利要求6所述的方法，其中Y是式（II）的化合物：

其中

R1是-H、-O-X、N(X)₂或-S-X；

R2是-H、-O-X、-N(X)₂或-S-X；

R3是-H、-OH、-NH₂或-SH；

R4是-H、-O-X、-N(X)₂或-S-X；

R5是-H、-O-X、N(X)₂或-S-X；

R6是-CON(X)₂或CO-X，

其中

H是氢；

O是氧；

S是硫；

N是氮，且

X是H、烷基或芳基。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述结合物包括至少两个式（II）的化合物Y。

9.根据权利要求1、6、7或8所述的方法，其中所述结合物包括一个或多个阿魏酸残基，或其衍生物。

10.根据权利要求1或权利要求6～9中任一项所述的方法，其中所述结合物包括可检测标记物，所述可检测标记物为荧光物质、发光物质、发色物质或放射性物质。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中α-氰基-4-羟基肉桂酸（ACHCA）或其衍生物的量在约0.15mM至约50mM的范围内。

12.根据权利要求11所述的方法，其中ACHCA的量在约0.75mM至约5.75mM的范围内。

13.根据权利要求11所述的方法，其中ACHCA的量在约5.85mM至约50mM的范围内。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述靶标并不固有地包括氧化还原酶活性，且所述活性经由试剂与所述靶标相连。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述试剂是靶标特异性结合剂或能够特异性结合至与所述靶标相连或相关联的物质的试剂。

16.根据权利要求15所述的方法，包括

a）将假定包括所述靶标的样本与一种或多种结合剂孵育，其中至少一种结合剂是靶标特异性结合剂且至少一种结合剂包括具有氧化还原酶活性的酶；

b）在权利要求1～13中任一项所述的水溶液中孵育样本（a）；

c）在样本（b）中检测包括一种或多种能够作为所述酶促活性的底物的化合物以及可检测标记物的结合物分子的沉积。

17.根据权利要求1、14、15或16所述的方法，其中所述靶标是生物学分子。

18.根据权利要求1、14、15、16或17所述的方法，其中至少一种所述结合剂是抗体。

19.根据权利要求18所述的方法，其中第一结合剂是包括过氧化物酶或酚氧化酶的一个部分的多克隆一抗的(Fab)₁片段。