[发明专利]睾丸体细胞来源的多能干细胞、其制备方法以及包含其的治疗勃起功能障碍的药物组合物

说明书

技术领域

本发明提供睾丸体细胞来源的多能干细胞，更具体地说，提供对CD34以及CD73均表现为免疫反应阳性、且来源于睾丸体细胞的多能成体干细胞。并且，本发明还提供所述睾丸体细胞来源的多能干细胞的制备方法以及包含其的治疗勃起功能障碍的药物组合物。

背景技术

由于人的成体组织特异性干细胞能修复及/或替换损伤组织，因此在临床上具有临床实用性。然而由于缺乏合适的组织特异性干细胞标记物，成体干细胞的鉴定被证实为是非常困难的。且对成体干细胞在临床上的应用限制更大的是，其在培养过程中具有有限的寿命，且相比于人胚胎干细胞（ESCs），其具有有限的分化能力。至今，分离出的成体干细胞中，骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）的特性分析的最为清楚。BM-MSCs由于是10年前已被鉴定，衍生出很多中胚层来源的分化的细胞形态。但是，BM-MSCs的分离会给患者带来极大的痛苦，且即使成功进行了分离，在培养基中维持为BM-MSCs也非常困难。其是由于BM-MSCs容易发生老化（通常为第8代细胞）；容易丧失分化能力；并且有的情况下，进行体外培养扩增后，会形成肿瘤性细胞。干细胞的其他来源包括牙髓（dental pulp）、脐带胶样组织、羊膜以及脂肪组织，然而这些其他来源的干细胞具有有限的寿命以及分化能力。

特异性干细胞标记物中，CD34可在早期造血（hematopoietic）以及血管相关（vascular-associated）组织中被发现。CD34是一种116-kD型I型跨膜糖蛋白，但对其确切的功能几乎没有报道。在造血系统中，表面表达CD34的细胞，可在细胞因子或生长因子的刺激下增殖，并且可分化为整个的淋巴造血系统（Lymphohematopoietic lineages）。因此，CD34一直被用作辅助鉴定以及分离淋巴造血干细胞/前体细胞群的标记物；且最近用于辅助鉴定包括肌卫星细胞以及表皮前体细胞的其他组织特异性干细胞的标记物。最近，有报道指出CD34阳性基质细胞在包括乳房、输卵管（fallopian tubes）、甲状腺、直肠、胰腺、子宫颈部以及睾丸等的多种器官中均有分布（Kim J,Seandel M,Falciatori I,et al.CD34+testicular stromal cells support long-term expansion of embryonic and adult stem and progenitor cells.Stem Cells.2008；26：2516-2522）。脂肪来源基质细胞（adipose-derived stromal cell,ASC）群中，CD34阳性细胞是通过与内皮细胞的结构以及功能上的相互作用，从而在血管稳定性方面发挥重要的作用的常驻血管周细胞（resident pericyte，）。其他研究中，CD34阳性细胞较CD34阴性细胞表现出更高的增殖能力以及集落形成能力，且表现出更低的分化能力。因此，研究人员提出CD34的表达在未成熟状态下，针对向特定系统的生理分化过程反相关（Suga H,Matsumoto D,Eto H,et al.Functional implications of CD34expression in human adipose-derived stem/progenitor cells.Stem Cells Dev.2009;18:1201-1210）。但是，CD73是连接有糖基磷脂酰肌醇（GPI）的膜结合糖蛋白，将细胞外核苷一磷酸水解为生物活性的核苷中间体。该抗原可在间充质干细胞、B-细胞及T-细胞的亚型（subsets）以及包含内皮细胞的大部分细胞中被发现。因此，该分子作为鉴定来源于不同的组织的间充质干细胞的标记物而使用。有趣的是，至今分离出的间充质干细胞中没有一个是同时表达CD73以及CD34。