[发明专利]用于特异性识别人肝羧酸酯酶1的单克隆抗体、生成单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其用途有效
申请号: | 201280029813.2 | 申请日: | 2012-04-17 |
公开(公告)号: | CN104066749A | 公开(公告)日: | 2014-09-24 |
发明(设计)人: | 白隆基;罗瑾 | 申请(专利权)人: | 延世大学校产学协力团 |
主分类号: | C07K16/18 | 分类号: | C07K16/18;C07K16/40;C12N5/16;G01N33/574;C07K1/14 |
代理公司: | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人: | 黎艳;胡杰 |
地址: | 韩国*** | 国省代码: | 韩国;KR |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 特异性 识别 羧酸 单克隆抗体 生成 杂交瘤 细胞株 及其 用途 | ||
技术领域
本发明涉及用于特异性识别人肝羧酸酯酶1的单克隆抗体、生成所述抗体的杂交瘤细胞株及其用途,该单克隆抗体用于从人体临床标本如组织和血液中客观地分析出人肝羧酸酯酶1的表达水平。
背景技术
人羧酸酯酶(hCE)可主要被分为具有不同特性和结构的异构体,如人羧酸酯酶1(hCE1)、人羧酸酯酶2(hCE2)和人羧酸酯酶3(hCE3)(Imai T,Drug Metab Pharmacokinet.,vol.21,pp.173-185,2006)。hCE1为一般在肝脏中被生物合成的酶,并能识别亲水性分子的酰基而分解摄入到组织内的化学物质。然而,hCE2为一般在肠内被表达的酶,是与hCE1的同源率为47%的独立蛋白质,而且与摄入到肠内的亲水性分子的酰基反应。hCE3为一般在大脑中被表达的酶,同时也是与hCE1的同源率为50%的独立蛋白质。
肝-羧酸酯酶1是一种在肝、肠、肾、肺、心脏或巨噬细胞中被表达的酶,但在肝中的表达比其他地方高出10~100倍。所述肝-羧酸酯酶1具有三种主要作用:第一,它具有外来物质代谢功能,其通过改变非活性药物的酯或酰胺结构,将摄入到人体中的非活性药物转化成活性物质。例如,洛伐他汀(lovastatin)可被转化成有活性形式来降低胆固醇,还用来将在体内有毒性的可卡因和海洛因分别转化成无毒的可卡乙碱和吗啡。第二,根据需要它通过分解和组合体内的胆固醇和脂肪酸的酯结构来调节胆固醇代谢,以及第三,它可以通过直接与蛋白质,即与可识别内质网中巨噬细胞免疫的C-反应蛋白(CPR)结合而调节功能(Redinbo MR.,Biochem.Soc.Trans.,31,pp.620-624,2003;Redinbo MR.,Drug Discov.Today.,10,pp.313-325,2005)。肝-羧酸酯酶1的另一特性是,在由化学物质引发肝癌的小鼠的肝微粒体中其酶活性会大幅下降(Maki T.,Jpn.J.Cancer Res.,82,pp.800-806,1991),但尚未发现其机制。
至今,通过使用酯酶的非特异性底物,如磷酸对硝基苯酯或乙酸对硝基苯酯,来分析体内肝-羧酸酯酶1的活性程度并使之作为酶滴定值。根据此方法,无法测定单独肝-羧酸酯酶1的特异性活性,因为在血液中具有酯酶功能的白蛋白、胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶等也有相同的活性(Li B.,Niochem.Pharmacol.,70,pp.1673-1684,2005)。因此,需要一种在短时间内能够从大量的标本中有选择地并有效地分析肝-羧酸酯酶1蛋白的方法,这种方法就 是酶免疫测定法。酶免疫测定法是一种通过抗体与目标蛋白质(抗原)的结合反应来诱导抗原-抗体结合、并在结合于酶上的抗体与底物间形成的复合反应中由结合度所产生的显色或荧光显色来定量临床标本中目标蛋白质的方法。
最近,本发明人证明了在人血浆中存有肝-羧酸酯酶1,在肝癌组织中肝-羧酸酯酶1的表达水平与正常的肝组织中肝-羧酸酯酶1的表达水平相比有下降,但在肝癌患者的血浆中肝-羧酸酯酶1的表达水平比正常人的血浆中肝-羧酸酯酶1的表达水平平均增长2.8倍或更多(Na K.et al.,Proteomics.9,pp.3989-3999,2009)。然而,所述实验中使用的肝-羧酸酯酶1的抗体是市面上可见的多克隆抗体(Abcam,ab1875),而且非特异性蛋白质可以与之结合,此外其免疫沉淀反应的有效性会有下降。
发明内容
技术问题
本发明在于提供能够有效地分析组织或血液中肝-羧酸酯酶1的肝-羧酸酯酶1的单克隆抗体、以及由所述抗体生成的杂交瘤细胞株。
进一步,本发明在于提供所述抗体的用途,即该抗体可用于分离并纯化肝-羧酸酯酶1,从血液中检测肝-羧酸酯酶1,而且能特异性地诊断肝癌。
技术方案
本发明的一方面提供与人肝羧酸酯酶1蛋白特异性结合的单克隆抗体,该单克隆抗体是由保藏号为KCLRF-BP-00282的杂交瘤所生成的。
本发明的另一方面提供保藏号为KCLRF-BP-00282的杂交瘤细胞,它能生成本发明的单克隆抗体。
进一步,本发明的另一方面提供用于分离并纯化人肝羧酸酯酶1蛋白的、含有本发明的单克隆抗体的组合物。
进一步,本发明的另一方面提供用于检测人肝羧酸酯酶1的、含有本发明的单克隆抗体的组合物。
进一步,本发明的另一方面提供用于检测尿液或血液中人肝羧酸酯酶1浓度的方法,该方法包括通过将本发明的单克隆抗体与样本进行接触来检测抗原-抗体复合物的形成。
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