[发明专利]具有增强灵敏度的细胞介导免疫应答测定

说明书

申请数据

本发明与2011年6月29号提交的题为“具有增强灵敏度的细胞介导免疫应答测定”的美国临时专利申请号61／502,811相关并要求优先权，其全部内容通过引用纳入本文。

技术领域

本公开一般涉及基于免疫学的诊断测定领域，所述基于免疫学的诊断测定包括检测细胞介导免疫应答的测定。本发明教导了以具有增强灵敏度的细胞介导免疫应答为基础的对象接触抗原的诊断。本文预期的测定能够整合到标准病理学架构中以提供诊断报告系统和促进临床护理管理。

发明背景

本说明书中作者的发表物详细书目在说明的结尾按字母顺序集中。

在该说明书中参考任何现有技术不应作为或不应视作承认或任何提示形式表明该现有技术在任何国家中构成一般常识的一部分。

基于免疫学的诊断测定是检测各种疾病状况的重要工具。这些测定类型的有效性取决于免疫系统内成分的特异性。尽管有这种特异性，基于免疫学的诊断对于检测低级感染或持续低水平感染的存在或在具有活性或潜伏感染疾病状态的对象中不总是足够灵敏。需要开发在细胞介导免疫应答方面具有增强灵敏度的诊断测定。

基于免疫学的一种诊断方法形式涉及分离细胞培养或全血液培养中抗原或有丝分裂原的T细胞激活，然后是检测效应分子，例如经刺激的T细胞(也称为效应T细胞)生成的细胞因子。效应分子一般用诸如酶免疫分析，多元珠分析，酶联免疫斑点法(ELISpot)和流式细胞仪等技术检测。这些测定用于检测疾病特异性T细胞反应。T细胞的一个例子是QuantiFERON(注册商标；塞尔雷斯蒂斯有限公司(Cellistis Limited))。另一种测定使用15聚体肽抗原以刺激T细胞。然而，这样长度的肽尽管能够被CD4⁺T细胞检测到，但是其太长以至于不能被CD8⁺T细胞检测到。

快速评估细胞介导免疫的能力并且具有高度的灵敏度在临床上具有重要意义。尤其在免疫系统受损患者的情况中。临床医师需要对疾病状态的发展及其对宿主免疫系统的影响做出正确评价。

但是，需要改进对象内细胞介导免疫应答测定的灵敏度。

发明概述

本文提供了用于检测对象中细胞介导免疫应答的方法，所述方法包括将来自对象的淋巴细胞与衍生自蛋白抗原的肽孵育，所述肽包括一组每个有约7-14个氨基酸长度的肽与一组超过15个氨基酸长度的肽的组合，其包括全部或部分的所述蛋白抗原，并且然后筛选由活化淋巴细胞产生的效应分子水平。

“约7-14个氨基酸”表示7、8、9、10、11、12、13或14个氨基酸。这在本文视作第一组肽。“超过15个氨基酸”指从16个氨基酸至蛋白抗原的全长，包括16-50个氨基酸。这视作第二组肽。本方法不限于哪组肽称为第一组或第二组。每个组包括从至少一个肽到一系列重叠的肽。

衍生自蛋白抗原的7-14个氨基酸的肽和超过15个氨基酸的肽与淋巴细胞共同孵育得到更灵敏的测定，使得能够比其他情况更早检测淋巴细胞刺激成为可能。增加的灵敏度包括与用衍生自抗原的7-14个氨基酸范围内或＞15个氨基酸范围内或全抗原自身的单个肽共孵育相比增加至少10％的效应分子检测。增加细胞介导免疫应答测定灵敏度的能力还能使检测效应分子的较低灵敏度方法可行。此外，在所公开测定中检测的细胞介导免疫应答的量级可能与疾病阶段、发展和／或严重性相关。因此，本公开指导对象内细胞介导免疫应答的测定。

本发明不限于任意某个理论或作用模式，两组肽即7-14聚体肽和＞15聚体肽能够被CD4⁺和CD8⁺T细胞同时检测。CD4⁺T细胞识别＞15聚体肽而CD8⁺T细胞识别7-14聚体肽。这些肽可在本文称为“CD4⁺肽”(＞15聚体肽)或“CD8⁺肽”(7-14聚体肽)。

因此在本文中提供了一种用于测定对象中细胞介导免疫应答活性的方法，所述方法包括使来自对象的淋巴细胞与至少两组肽接触，第一组包括一种或多种约7-14个氨基酸残基长度的肽，而第二组包括一种或多种16个或更多氨基酸的肽，其全部或部分的包括抗原蛋白，并且测量来自免疫细胞的免疫效应分子的出现或水平升高，其中所述免疫效应分子的出现或水平指示对象对于抗原的细胞介导应答水平。