[发明专利]用于免疫测定方法的缀合物

说明书

技术领域

本发明涉及用于免疫测定方法如免疫层析法(下文中有时简称为IC)的缀合物(conjugate)，所述缀合物包含用抗体或抗原敏化的胶态金属。更具体地，本发明涉及用非生物来源的组分和生物来源的组分封闭的缀合物。本发明还涉及各自使用所述缀合物的IC检测方法和用于免疫层析法的测试条，以及用于所述缀合物的制备方法。

背景技术

用于免疫测定方法的充当缀合物(如标记的抗体)的组分的标记的一个实例是胶态金粒子(下文中有时简称为胶态金)，并且由所述胶态金粒子所致的显色使得能够确认测量结果。此外，基于显色的程度，还有可能定量检测样品中的待检测物质。

当将胶态金用作充当标记抗体的组分的标记时，胶态金的表面具有易于非特异性地吸附来源于样品的蛋白质和其他物质以及有意结合的抗体的性质。为了抑制这样的非特异性吸附，通常进行封闭处理，所述封闭处理涉及用含有牛血清清蛋白(BSA)、酪蛋白等作为活性组分的生物来源的封闭剂(下文中有时简称为生物来源的封闭剂)来涂覆胶态金没有被抗体结合的表面部分。含有非生物来源的组分作为活性组分的封闭剂(下文中有时简称为非生物来源的封闭剂)也可商购获得。然而，当本发明的发明人简单地用非生物来源的封闭剂替代生物来源的封闭剂和单独使用前者时，在封闭处理后缀合物自身发生聚集，并且因此不能够被再混悬，或者非生物来源的封闭剂趋于自然地聚集，并且因此例如其作为试剂的稳定性受损。因此，本发明的发明人未能够发现任何商购获得的非生物来源的封闭剂能够投入到实际应用中。

另一方面，在使用标记的抗体的定量免疫测定中，当待检测物质是多价抗原时，产生以下问题。由于抗原经由所述标记的抗体的相继交联，测量信号随着抗原浓度的增加而快速增加，并且因此在抗原浓度高的范围内观察不到取决于待检测物质的浓度的灵敏度的差异，这导致不能进行精确的定量。在此情况中，进行稀释样品的操作不是优选的，因为测量误差变得易于发生并且增加用于稀释操作的步骤使得该方法变得复杂。首先，预测哪个样品具有高的抗原浓度本身就不实际。

作为用于扩大其中待检测物质可以被测量的浓度范围的技术，例如，提供了描述在专利文献1中的技术。在专利文献1中，公开了这样的技术，所述技术涉及在用于免疫层析法的、包含通过在胶态金上固定抗体获得的标记抗体的测试条中，使用至少两种类型的具有不同粒度分布的胶态金粒子组的混合物作为缀合物。然而，由于所需的时间和成本，制备多种具有取决于待检测物质和目的的不同粒度分布的胶态金的混合物是不实际的。相关技术文献

专利文献

专利文献1：JP2010-32396A

发明内容

发明要解决的问题

为了解决相关技术的问题，本发明要实现的一个目的是：在使用其上固定有抗体或抗原的胶态金属进行免疫测定的情况中，通过简单的方法，根据待检测的对象调节检测灵敏度和扩大测量范围，同时抑制在封闭处理后缀合物之间的聚集。另一个目的是在实现上述目的的同时防止杂质等在胶态金属表面的非特异性吸附。

解决问题的方式

本发明的发明人进行了广泛的研究以实现这样的目的，并且作为结果，已发现在其上固定有抗体的胶态金属粒子的表面的封闭中，组合地使用非生物来源的组分和生物来源的组分能够调节测量灵敏度和/或扩大测量范围。因此，本发明的发明人完成了本发明。即，尽管迄今由于当单独使用非生物来源的组分作为封闭剂时胶态金属发生聚集，还不可能使用非生物来源的组分作为封闭剂，本发明的发明人已首次发现其与生物来源的组分的组合使用不仅能够用作封闭剂而且还展现出新的效果，即，调节检测灵敏度和/或扩大测量范围。

具体地，本发明具有以下构成。

<1>一种缀合物，所述缀合物包含具有用抗体或抗原敏化的表面的胶态金属，其中所述胶态金属的表面用非生物来源的组分和生物来源的组分封闭。

<2>根据构成<1>所述的缀合物，其中所述生物来源的组分包括选自由以下各项组成的组中的一种或多种：BSA；酪蛋白；丝胶蛋白(sericin)；对应于作为大肠杆菌来源的热休克蛋白(HSP)的DnaK的氨基酸序列的氨基酸419至607的多肽；NEO PROTEIN SAVER；StartingBlock^TM(PBS)封闭缓冲液；和Stabil Coat。