[发明专利]胎儿有核红细胞的检测

权利要求书

1.一种从样本中检测、分离和/或离析至少一种胎儿有核红细胞(FNRBC)的方法，包括：

a)用离心法在包含选自1.077-1.120g/ml的密度的密度梯度介质中处理样本；

b)使样本与在至少1:20,000的浓度下的特异性结合CD147的抗体或其抗原结合片段接触，从而制成一种混合物；

c)保持该混合物处于在所述试剂和样本中的CD147之间形成复合物的状态下；以及

d）从混合物中分离所述复合物；

从而从样本中检测、分离和/或离析FNRBC。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述抗体或其抗原结合片段的浓度选自至少1:10,000、至少1:1000和1:100。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述密度梯度介质包括Percoll^TM溶液。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述的Percoll^TM溶液具有1.118g/ml的密度梯度。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述抗体为多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或其结合。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，利用免疫磁性分离法、流式细胞计量术或其结合，从所述混合物中分离免疫复合物。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述样本是母血、母体组织、脐带血或其结合。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述的母体组织是滋养层组织、肝脏组织、胎盘组织或其结合。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，每毫升母血中分离出大约1.16个e+FNRBCs。

10.根据权利要求7所述的方法，其进一步包括使所述母血与特异性结合至少一种白细胞上的至少一种标记物的抗体或其抗原结合片段接触。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述标记物为CD45、CD14或其结合。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括使所述样本与核染剂接触。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述核染剂为烟酸己可碱染剂、DAPI染剂、吖啶橙或其结合。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，从免疫复合物中进一步分离所述FNRBC。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，从免疫复合物中分离所述FNRBC包括将所述免疫复合物置于低pH。

16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，进一步检测所述FNRBC用于性别辨别。

17.根据权利要求16所述的方法，其中，用于性别辨别的检测是确定SRY基因的存在，其中，如果存在SRY基因，则胎儿为男性，而如果不存在SRY基因，则胎儿为女性。

18.根据权利要求17所述的方法，其中，使用全基因组扩增和实时聚合酶链式反应（PCR）检测SRY基因。

19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，进一步检测所述FNRBC用于至少一种产前异常。

20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述的产前异常选自染色体病、基因病或其结合。

21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述的产前异常选自唐氏综合征、爱德华兹综合征、帕塔综合征、神经管缺陷、脊柱裂、颚裂、泰-萨克斯病、镰刀形红细胞贫血病、地中海贫血病、囊性纤维病、脆性X染色体综合征、脊髓性肌萎缩、肌强直性营养不良、杭廷顿氏舞蹈病、夏-马-图三氏病、血友病、杜克肌营养不良、线粒体异常、遗传性多发性外生骨疣、成骨不全症及其结合。

22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述的FNRBCs用荧光原位杂交（FISH）、聚合酶链反应（PCR）、多重配体依赖性探针扩增（mpla）、短腱重复分析、阵列比较基因组杂交(CGH)、基因分型、单重序列测定、大规模平行序列测定或其结合进行进一步的检测。