[发明专利]抗神经生长因子抗体及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种制备适用于马的抗体的方法，包括以下步骤：

从除马以外的物种提供供体抗体，其中所述供体抗体对所述马中存在的靶抗原具有结合特异性；

将所述供体抗体框架区氨基酸序列的每一氨基酸残基与一个或多个马抗体框架区氨基酸序列中对应位置存在的每一氨基酸残基进行比较，以鉴别出所述供体抗体框架区氨基酸序列内与所述一个或多个马抗体框架区氨基酸序列内对应位置的一个或多个氨基酸残基不同的一个或多个氨基酸残基；以及

用所述一个或多个马抗体中对应位置存在的一个或多个氨基酸残基取代所述供体抗体中的一个或多个鉴别出的氨基酸残基。

2.如权利要求1所述的方法，其中取代所述一个或多个鉴别出的氨基酸残基的步骤包括：用对应位置存在的与一个或多个被取代的氨基酸残基具有最高同源性的一个或多个氨基酸残基取代所述一个或多个鉴别出的氨基酸残基。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述方法进一步包括：用衍生自马抗体的重链和/或轻链的恒定结构域取代所述供体抗体的重链和/或轻链的恒定结构域。

4.如权利要求3所述的方法，其中用HC2型马恒定结构域取代所述重链的恒定结构域。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述靶抗原是神经生长因子(NGF)。

6.能够特异性结合马神经生长因子(NGF)的中和抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗体结合片段包含轻链可变区和/或重链可变区，所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或者与所述氨基酸序列具有至少85%同一性的氨基酸序列，所述重链可变结构区包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或者与所述氨基酸序列具有至少85%同一性的氨基酸序列。

7.如权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是嵌合抗体或马源化抗体。

8.如权利要求6或7所述的抗体或其抗原结合片段，其中通过氨基酸取代或缺失的方式来选择或修饰所述重链恒定结构域，使得所述恒定结构域并不介导下游的效应子功能。

9.如权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链是马同种型HC2或HC6重链。

10.如权利要求9所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链是马同种型HC2重链。

11.如权利要求6-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO:4或者与其具有至少85%同一性的氨基酸序列。

12.如权利要求6-11中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9的氨基酸序列或者与所述氨基酸序列具有至少85%序列同一性的氨基酸序列。

13.如权利要求12所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6或者与所述氨基酸序列具有至少85%同一性的氨基酸序列。

14.抗马NGF抗体或其马NGF结合片段，所述抗体或抗体结合片段包含轻链可变区和/或重链可变区，其中所述轻链可变区包含以下的至少一个：

由氨基酸序列SEQ ID NO:10组成或包含其的FR1框架区；

由氨基酸序列SEQ ID NO:11组成或包含其的FR2框架区；

由氨基酸序列SEQ ID NO:12组成或包含其的FR3框架区；以及

由氨基酸序列SEQ ID NO:13组成或包含其的FR4框架区；

所述重链可变区包含以下的至少一个：

由氨基酸序列SEQ ID NO:14组成或包含其的FR1框架区；

由氨基酸序列SEQ ID NO:15组成或包含其的FR2框架区；

由氨基酸序列SEQ ID NO:16组成或包含其的FR3框架区；以及

由氨基酸序列SEQ ID NO:17组成或包含其的FR4框架区。