[发明专利]由人巨细胞病毒感染的细胞制造“致密体”（DB）

说明书

技术领域

本发明涉及“致密体”（DB）的制造和含有DB的药学组合物。

背景技术

还被称为人类疱疹病毒5的人巨细胞病毒（HCMV）为一种覆膜的双股DNA病毒，其属于疱疹病毒。HCMV对于健康的成人是通常无害的。然而在妊娠中该病毒是特别危险的，并且可以对未出生的胎儿甚至是危及生命的。对于具有虚弱的免疫系统的人，也可能由被HCMV感染发展成严重的疾病。因此，特别有危险的是艾滋病患者、移植受者、干细胞移植后的白血病患者、以细胞抑制剂治疗的患者等等。

对于具有虚弱的免疫系统的患者，在HCMV感染时使用病毒抑制剂，例如更昔洛韦、膦甲酸、西多福韦、并且也可能是阿昔洛韦。

此外，从多年前起已经致力于抗HCMV的痘苗或疫苗的发展。因此例如尝试了，以削弱的或减毒的活痘苗引发所期望的免疫力。然而由此仅仅可以获得有限的保护。

另外的方式在于，借助于所谓的“致密体”（DB）实现接种疫苗。在这种情况下涉及由HCMV派生出的、在电子显微镜中可见的结构。DB为在其被膜中膜围绕的亚病毒颗粒，被膜由细胞脂质膜派生而出、嵌入病毒糖蛋白。这些病毒蛋白很有可能以天然的构象存在于病毒脂质膜中。类似于病毒颗粒，DB在被感染的细胞的细胞质中形成并且最终由细胞排出。DB的90%DB蛋白质量由病毒编码为所谓的PP65（UL83）蛋白组成。此外在DB中，还可以探测到病毒蛋白pp150（UL32）、gH（UL75）、gM（UL100）以及gB（UL55）。因为DB不含有病毒DNA和病毒壳体，所以其是非感染性的。

在现有技术中描述了，DB由于其高度近似于HCMV抗原特性的抗原特性，适合作为抗HCMV感染或在HCMV感染时作用的痘苗。这种痘苗被证明是特别有效的。因为DB是非感染性的，所以风险方面和副作用与活痘苗的情况相比明显较少受批评的。因此，含有DB的、名称为“VMP2001”的痘苗已经存在于临床试验中。以DB接种疫苗的原则和优点例如在WO00/5372中进行了描述。

由于DB在HCMV的正常侵染循环中：i）仅以微小的量形成并且因此仅以有限的量提供；并且ii）DB制剂可能在一定情况下被感染性的HCMV污染，存在对以下方法的需求，即，通过该方法DB的形成可以有针对性地提高并且防止通过感染性的HCMV而污染。

Reefschlaeger等（2001,Journal of Antimicrobial Chemotherapy（抗菌化学疗法杂志）48,757-767）和Buerger等（2001,Journal of Virology（病毒学杂志)75,9077-9086）描述了一种名称为BAY38-4766的物质，其应当提升所形成的DB的量。

Hwang等（2007,Journal of Virology81,11604-11611）和Hwang等（2009,Antimicrobial Agents and Chemotherapy（抗微生物制剂与化学疗法）53,5095-5101）描述了苯并咪唑基-D核糖核苷，其同样能够适用于所形成的DB的量的提升。

然而，迄今所描述的用于DB形成优化的所谓适用的物质都没有在实践中得以证明。

发明内容

在这个背景下，本发明的任务在于：提供另外的物质，该物质作为在生产DB时的添加物i）防止DB制剂被感染性的HCMV污染；ii）在DB生产的范畴下提升DB的产率。

这个任务通过如下物质的用途解决，该物质选自以下物质：

本发明的另外的任务在于，提供一种用于制造DB的新颖的方法。

这个另外的任务通过具有以下步骤的方法解决（1）提供在适当的介质中的被人巨细胞病毒（HCMV）感染的生物细胞，以及（2）以选自以上所列出的物质（A）到（D）的物质培养受感染的生物细胞。

发明人认识到，以上的鉴定证明的物质极其良好地适应于制造DB。可以特别地注意到的是：被HCMV感染的生物细胞，例如原代成纤维细胞，在存在这些化合物的情况下在细胞质中富集高浓度的DB并且释放到介质中。在此，作为特别的优点表明的是，物质（A）到（D）防止完好的病毒颗粒在细胞核中组合，并且因此导致，没有感染性的HCMV由已感染的细胞中排出。因此可以容易地由介质或已感染的细胞的裂解液分离DB，而无需担心被感染性的病毒颗粒污染。

根据本发明，这些允许HCMV的生物细胞是适用于使用在该方法中的。