[发明专利]变异狂犬病毒及疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种变异狂犬病毒、含有此病毒的狂犬病疫苗制剂、狂犬病的预防和治疗方法、狂犬病疫苗制造方法以及用于狂犬病疫苗制剂制造的使用等，所述变异狂犬病毒在狂犬病毒结构蛋白中至少是N蛋白的273位为苯丙氨酸（phenylalanine）以外的其他氨基酸（amino acid），N蛋白的394位为酪氨酸（tyrosine）以外的其他氨基酸，G蛋白的333位为精氨酸（arginine）或赖氨酸（lysine）以外的其他氨基酸。

背景技术

狂犬病是一种来自咬伤等所致的感染狂犬病毒而引起的一种人畜共患感染性疾病。治疗方法尚未明确，发病时伴有重度神经症状，几乎100%死亡。

狂犬病毒具有非常广的宿主范围，可以使包括人在内的所有哺乳类动物感染。在发展中国家，主要感染源是犬，在发达国家，主要感染源是狐狸、浣熊、臭鼬、蝙蝠等野生动物。据推测，即使现在，每年也有50000人以上死于狂犬病。

狂犬病可以通过接种疫苗来预防，目前灭活狂犬病疫苗已广泛使用。但是，使用灭活疫苗时，为了得到理想效果，需要大量的抗原，疫苗成本增加。另一方面，虽然弱毒活疫苗与灭活疫苗相比能够更加廉价地制作，但存在安全性隐患。因此，特别是在发展中国家，疫苗尚未充分普及。

狂犬病毒属于弹状病毒科狂犬病毒属。病毒粒子具有宽60nm至110nm、长130nm至250nm的弹丸状的形态，由5个结构蛋白即G蛋白、M蛋白、N蛋白、P蛋白、L蛋白组成。病毒基因组全长约12000个碱基，负链为单链RNA，含有自上游(3’末端侧)开始依次为编码N、P、M、G、L的五个结构蛋白的基因序列。

近年来，随着狂犬病毒的病原性决定因子的研究等的进展，已知能够通过将G蛋白的333位的氨基酸置换为精氨酸和赖氨酸以外的其他氨基酸来使病毒的毒性减弱(参考非专利文献1等)。另外，将G蛋白的333位氨基酸置换成弱毒型后所得的病毒作为野生动物的口服免疫用的弱毒活疫苗的情况，在欧洲已得到实际应用(参考专利文献1等)。

据报道，这种弱毒变异型病毒即使G蛋白333位变异成弱毒型，也可通过突变将G蛋白194位突变为赖氨酸而使其毒性增强(参考非专利文献2)。因此，存在因G蛋白194位的突变而导致病原性恢复的担忧，仅G蛋白333位弱毒变异型病毒的安全性未必可靠。

本发明人公开了以下情况：就狂犬病弱毒株Ni-CE株而言，狂犬病N蛋白273位和394位氨基酸对于通过维甲酸诱导基因-I（Retinoic acid-inducible gene I，RIG-I）介导的抗病毒应答及病原性是重要的(参考非专利文献3)。

其他，非专利文献4及非专利文献5是关于后述的基于反向遗传法的人工合成狂犬病毒变异株的文献。

专利文献1：US2011/0064764A1

非专利文献1：Dietzschold B et al,“Characterization of an antigenic determinant of the glycoprotein that correlates with pathogenicity of rabies virus.”Proc.Natl.Acad.Sci.USA.80:70-74,1983

非专利文献2：Milosz Faber et al,“A single amino acid change in rabies virus glycoprotein increases virus spread and enhances virus pathogenicity.”Journal of Virology,vol.79,No.22p14141-14148.2005

非专利文献3：Tatsunori Masatani et al,“Amino acids at position273and394in rabies virus nucleoprotein are important for both evasion of host RIG-I-mediated antiviral response and pathogenicity.”Virus Research155(2011)168-174.