[发明专利]具有改进活性的DNA聚合酶

权利要求书

1.DNA聚合酶，其具有与对照DNA聚合酶相比增强的逆转录酶效率，其中，所述DNA聚合酶的对应于SEQ ID NO:1的522位的氨基酸是除E以外的任何氨基酸，并且其中，除了所述对照DNA聚合酶的对应于SEQ ID NO:1的522位的氨基酸是E之外，所述对照DNA聚合酶具有与所述DNA聚合酶相同的氨基酸序列。

2.权利要求1的DNA聚合酶，其在聚合酶结构域中包含基序，所述基序包含

其中

X₁是S、R、N或A；

X₂是A、I或V；

X₃是A、E、S或D；

X₄是V或A；

X₅是除E以外的任何氨基酸； 

X₆是A、L、E、P或K； 

X₇是L或I；

X₈是R、A或S；

X₉是E、G、N、K、D或P；

X₁₀是A、E、H或Y；

X₁₁是P或E (SEQ ID NO:8)。

3.权利要求1-2中任一项的DNA聚合酶，其在聚合酶结构域中包含基序，所述基序包含

其中：

X₁是S或R；

X₂是A或I；

X₃是A或E；

X₅是除E以外的任何氨基酸；

X₆是A、L或E；

X₇是L或I；

X₈是R或A；

X₉是E、G或N；

X₁₀是A或E；

X₁₁是P或E (SEQ ID NO:9)。

4.权利要求1-3中任一项的DNA聚合酶，其在聚合酶结构域中包含基序，所述基序包含

其中：

X₅是除E以外的任何氨基酸(SEQ ID NO:10)。

5.权利要求4的DNA聚合酶，其在聚合酶结构域中包含基序，所述基序包含

其中：

X₅是G (SEQ ID NO:11)。

6.权利要求1-5中任一项的DNA聚合酶，其中对应于SEQ ID NO:1的580位的氨基酸是除D或E以外的任何氨基酸。

7.权利要求1-6中任一项的DNA聚合酶，其中对应于SEQ ID NO:1的580位的氨基酸选自L、G、T、Q、A、S、N、R和K。

8.权利要求1-7中任一项的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶与选自以下的聚合酶具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％的氨基酸序列同一性：

(a) SEQ ID NO:1；

(b) SEQ ID NO:2；

(c) SEQ ID NO:3；

(d) SEQ ID NO:4；

(e) SEQ ID NO:5；

(f) SEQ ID NO:6；

(g) SEQ ID NO:7；

(h) SEQ ID NO:32；

(i) SEQ ID NO:33；

(j) SEQ ID NO:34；

(k) SEQ ID NO:35；

(l) SEQ ID NO:36；和

(m) SEQ ID NO:37。

9.权利要求1-8中任一项的DNA聚合酶，其中所述聚合酶与SEQ ID NO:1具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％的氨基酸序列同一性。

10.重组核酸，其编码权利要求1-9中任一项的DNA聚合酶。

11.表达载体，其包含权利要求10的重组核酸。

12.进行引物延伸的方法，包括：

在适于引物延伸的条件下将权利要求1-9中任一项的DNA聚合酶与引物、多核苷酸模板和三磷酸核苷接触，从而产生延伸的引物。