[发明专利]导入了二氧化碳的固定循环的微生物

权利要求书

1.乙酰CoA生产微生物，具有乙酰CoA生产循环，所述微生物为属于肠杆菌科的微生物，为埃希氏菌属细菌或泛菌属细菌；或属于棒状细菌的微生物，为棒状杆菌属细菌，

所述乙酰CoA生产微生物是通过如下方式得到的：向下述(a)、(b)、(c)、(d)及(e)中任一种均不具有的微生物中，不赋予(a)、(b)、(c)及(d)中任一种，赋予选自苹果酸硫激酶、苹果酰CoA裂解酶、乙醛酸醛连接酶、2－羟基－3－氧代丙酸还原酶、及羟基丙酮酸还原酶中的至少一种酶活性，其中，至少赋予苹果酸硫激酶活性；

(a)具有由丙二酸单酰CoA向丙二酸半醛或3－羟基丙酸的酶反应的二氧化碳固定循环，

(b)具有由乙酰CoA和CO₂向丙酮酸的酶反应的二氧化碳固定循环，

(c)具有由巴豆酰CoA和CO₂向乙基丙二酸单酰CoA或戊烯二酸单酰CoA的酶反应的二氧化碳固定循环，

(d)具有由CO₂向甲酸的酶反应的二氧化碳固定循环，

(e)选自苹果酸硫激酶和苹果酰CoA裂解酶中的至少一种，

所述乙酰CoA生产循环包括如下酶：

(f)选自以下(f-1)～(f-3)中的至少一者：

(f-1)丙酮酸激酶及丙酮酸羧化酶

(f-2)磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶

(f-3)磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶，

(g)苹果酸脱氢酶，

(h)苹果酸硫激酶，

(i)苹果酰CoA裂解酶，

(j)乙醛酸醛连接酶，

(k)选自以下(k-1)～(k-2)中的至少一者：

(k-1)2－羟基－3－氧代丙酸还原酶

(k-2)羟基丙酮酸异构酶及羟基丙酮酸还原酶，

(l)选自以下(l-1)～(l-2)中的至少一者：

(l-1)甘油酸2－激酶

(l-2)磷酸甘油酸变位酶及甘油酸3－激酶，和

(m)烯醇化酶。

2.如权利要求1所述的乙酰CoA生产微生物，具有如下的乙酰CoA生产循环：磷酸烯醇式丙酮酸或丙酮酸经由草酰乙酸、进而通过苹果酸硫激酶、苹果酰CoA裂解酶、乙醛酸醛连接酶而得到的2－羟基－3－氧代丙酸进一步经由2－磷酸甘油酸而再次转化为磷酸烯醇式丙酮酸。

3.如权利要求1所述的乙酰CoA生产微生物，其中，微生物为埃希氏菌属细菌，埃希氏菌属细菌具有的乳酸脱氢酶的活性被失活或降低。

4.如权利要求1所述的乙酰CoA生产微生物，其中，微生物为埃希氏菌属细菌，埃希氏菌属细菌具有的选自异柠檬酸裂解酶及苹果酸合酶中的至少一种酶的活性被失活或降低。

5.如权利要求1所述的乙酰CoA生产微生物，其中，微生物为埃希氏菌属细菌，埃希氏菌属细菌中硫解酶活性、CoA转移酶活性及乙酰乙酸脱羧酶活性被赋予或强化。

6.如权利要求1所述的乙酰CoA生产微生物，其中，微生物为埃希氏菌属细菌，埃希氏菌属细菌中硫解酶活性、CoA转移酶活性、乙酰乙酸脱羧酶活性及异丙醇脱氢酶活性被赋予或强化。

7.如权利要求1所述的乙酰CoA生产微生物，其中，微生物为泛菌属细菌，泛菌属细菌具有的富马酸水合酶A及富马酸水合酶C的活性被失活或降低。

8.如权利要求1所述的乙酰CoA生产微生物，其中，微生物为泛菌属细菌，泛菌属细菌具有的苹果酸合酶的活性被失活或降低。

9.如权利要求1所述的乙酰CoA生产微生物，其特征在于，所述苹果酸硫激酶为在由序列号71所示的来自扭脱甲基杆菌的mtkB的氨基酸序列中，第144位的氨基酸被异亮氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、谷氨酰胺或脯氨酸取代，或者，第244位的氨基酸被谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、赖氨酸或精氨酸取代的苹果酸硫激酶。