[发明专利]鉴定和分离导致转录增强的终止子序列的方法

权利要求书

1.终止子分子，其包含至少一种下述在表1中定义的增强终止子元件(ET)或如表2中定义的其组合，或任意这些ET或这些ET组合的互补物或反向互补物，其中包含所述ET或其组合的终止子分子导致与所述终止子分子功能连接的异源核酸分子的增强的表达。

2.终止子分子，其包含选自下述的序列

a)核酸分子，其具有如SEQ ID NO：1、2、3、4、57、58、59、60、61、62、63和64中定义的序列，或

b)核酸分子，其具有与SEQ ID NO：1、2、3、4、57、58、59、60、61、62、63和64具有至少60％同一性的序列，或

c)i)或ii)的核酸分子的100或更多个连续碱基的片段，其具有如同具有SEQ ID NO：1、2、3、4、57、58、59、60、61、62、63和64的序列的对应核酸分子的表达增强活性，或

d)核酸分子，其是任意之前在i)或ii)中提及的核酸分子的互补物或反向互补物，或

e)核酸分子，其可使用表5中显示的SEQ ID NO：63至96描述的寡核苷酸引物通过PCR得到，或

f)100个核苷酸或更多的核酸分子，其与包含SEQ ID NO：1、2、3、4、57、58、59、60、61、62、63和64描述的转录增强终止子的至少50个连续的核苷酸或其互补物的核酸分子在相当于下述的条件下杂交，即在7％的十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO4，1mM EDTA中在50℃下杂交，在2X SSC，0.1％SDS中在50℃下洗涤。

其中所述终止子分子导致与其功能连接的异源核酸分子的增强的表达。

3.鉴定和分离导致与终止子分子功能连接的异源核酸分子表达增强的终止子分子的方法，其包括以下步骤：

A)鉴定3′UTR，和

B)鉴定对应的基因组DNA

C)使用任意计算ET检测或IUPAC字符串匹配序列分析工具在B)中鉴定的组中鉴定包含在表1或表2中定义的任意ET或其组合的分子，和

D)分离至少250bp包含所述ET的基因组DNA。

4.产生重组终止子分子的方法，所述终止子分子增强与所述终止子分子功能连接的异源核酸分子的表达，所述方法包括以下步骤，在缺乏表达增强性能的终止子分子中引入至少一种在表1或表10中定义的ET元件或在表2中定义的其组合，或其互补物或反向互补物。

5.产生相比对应的对照植物或其部分具有一种或多种核酸分子的增强的表达的植物或其部分的方法，所述方法包括以下步骤：

a)将一种或多种包含在表1或2中定义的ET或其组合的终止子分子或在权利要求2的a)至f)中定义的终止子分子引入植物或其部分，

和

b)将所述一种或多种终止子分子与启动子和所述启动子控制下的核酸分子功能连接，其中所述终止子分子相对所述核酸分子和／或启动子是异源的。

6.权力要求5的方法，其包括以下步骤

a)将一种或多种包含在表1或2中定义的ET或其组合的终止子分子或在权利要求2的a)至f)中定义的终止子分子引入植物或其部分，和

b)将所述一种或多种终止子整合进所述植物或其部分的基因组中，使得所述一种或多种终止子与内源表达的核酸功能连接，所述内源表达的核酸相对所述一种或多种终止子是异源的，和任选地

c)从所述转化细胞再生包含所述一种或多种终止子的植物或其部分。

7.权利要求5至6的方法，其包括以下步骤：

a)提供表达构建体，其包含一种或多种包含在表1或2中定义的ET或其组合的终止子分子或在权利要求2的a)至f)中定义的终止子分子，所述终止子分子与启动子和一种或多种核酸分子功能连接，后者相对所述一种或多种终止子分子是异源的且处于所述启动子的控制下，和

b)将包含所述一种或多种终止子分子的所述表达构建体整合进所述植物或其部分的基因组中，和任选地

c)从所述转化的植物或其部分再生包含所述一种或多种表达构建体的植物或其部分。

8.权利要求5至7的方法，其中所述植物是单子叶或双子叶植物。

9.重组表达构建体，其包含一种或多种包含在表1或2中定义的ET或其组合的终止子分子或在权利要求2的a)至f)中定义的终止子分子。