[发明专利]计算优化的宽反应性的H1N1流感抗原

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2011年6月20日提交的美国临时申请No.61/498,800的优先权，所述临时申请以引用的方式全文纳入本文。

技术领域

本公开涉及可引起针对H1N1病毒分离株的宽反应性的免疫应答的优化的流感血凝素蛋白及其作为疫苗的用途。

背景技术

流感病毒是正粘病毒科（Orthomyxoviridae）家族的成员。有三个亚型的流感病毒，命名为A型流感、B型流感和C型流感。所述流感病毒粒子含有分段的负义RNA基因组，所述基因组编码以下蛋白：血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）、基质（M1）、质子离子通道蛋白（M2）、核蛋白（NP）、聚合酶碱性蛋白1（PB1）、聚合酶碱性蛋白2（PB2）、聚合酶酸性蛋白（PA）和非结构蛋白2（NS2）。HA、NA、M1和M2为膜相关蛋白，而NP、PB1、PB2、PA和NS2为核衣壳相关蛋白。M1蛋白是流感颗粒中最丰富的蛋白质。HA和NA蛋白是包膜糖蛋白，负责病毒吸附和病毒颗粒侵入细胞，并且是用于病毒中和及保护性免疫的主要免疫显性表位的来源。HA和NA蛋白都被认为是预防性流感疫苗的最重要组分。

每年，季节性流感仅在美国就导致超过300000例入院和36000例死亡（Simonsen等Lancet Infect Dis7:658-66,2007）。2009年新型H1N1流感病毒的出现表明新的流感大流行可如此快速地横扫全球。

目前在美国有两种获得批准的流感疫苗方法——灭活的裂解疫苗和减毒活病毒疫苗。灭活疫苗可有效地诱导体液免疫应答、但通常只有弱的细胞免疫应答。活病毒疫苗不能给予免疫减弱的或怀孕的患者，因为这些患者具有增加的感染风险。因此，存在对宽保护性流感病毒疫苗的需求。

发明内容

本文公开了用于引起针对H1N1流感病毒分离株的宽反应性的免疫应答的优化的H1N1流感HA多肽的产生。基于选择的分离自1918-2011年的H1N1病毒，通过一系列的HA蛋白比对和随后共有序列的产生，开发了所述优化的HA多肽。

本文提供了用于引起针对H1N1流感的宽反应性的免疫应答的具有优化的氨基酸序列的重组流感HA多肽。在一些实施方案中，所述HA多肽包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11相比，所述多肽的氨基酸序列包含不多于5、不多于6、不多于7、不多于8、不多于9或不多于10个氨基酸置换。在一些实施方案中，所述流感HA多肽没有N-末端的甲硫氨酸残基。

本公开内容还提供了编码所述重组HA多肽的分离的核酸分子和载体。还提供了包含所述载体的分离的细胞。

还提供了包含本文公开的优化的HA多肽的流感病毒样颗粒（VLP）和融合蛋白。

还提供了在可药用载体中包括本文公开的优化的流感HA多肽、融合蛋白或VLP的组合物。本公开内容还提供了通过给予所公开的组合物、融合蛋白或VLP而在受试者中引起针对流感病毒的免疫应答的方法。

还提供了通过给予受试者包含含有优化的HA多肽的VLP的组合物而针对流感病毒免疫所述受试者的方法。

根据以下参照附图进行的详细描述，本公开内容的上述和其他目的、特征和优点会变得更加清楚。

附图说明

图1为用于根据方法1产生H1N1HA共有序列的方法的示意图。

图2为用于根据方法2产生H1N1HA共有序列的方法的示意图。

图3为用于根据方法4产生H1N1HA共有序列的方法的示意图。

图4为用于根据方法5产生H1N1HA共有序列的方法的示意图。

图5为用于根据方法6产生H1N1HA共有序列的方法的示意图。