[发明专利]具有纤维素酶活性的多肽以及编码它的多核苷酸

说明书

参考序列表

本申请包含计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。

发明背景

发明领域

本发明涉及具有纤维素酶活性的多肽以及编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及核酸构建体、载体以及包含这些多核苷酸的宿主细胞连同生产和使用这些多肽的方法。

相关技术说明

蛰龙介属魔玉虫(Terebella lapidaria)(林奈(Linaeus)，1767)是只在海洋环境中生活的一种多毛动物。标本典型地长3-9cm并且直径4-5mm。

蛰龙介属魔玉虫(T.lapidaria)是将沙粒粘结在一起形成管状生境的管构建者。使用它们的多个带槽的触须，它们以有机材料、藻类和或小动物为食。蛰龙介属魔玉虫是具有广泛生态分布的海洋物种，可以发现于深达30-40m的潮间带和潮下带，潮间带和潮下带两者都是移动基体，例如沙、泥沙以及泥，而且还可以发现在硬基体上，例如岩层。

像很多食沙和岩屑的多毛动物一样，蛰龙介(Terebella)具有有力的消化生物表面活性剂的系统，并且该消化系统产生的酶已经明显演化至在中性pH或近中性pH的表面活性剂环境中有效发挥作用。

本发明提供了具有纤维素酶活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。

发明概述

本发明涉及具有纤维素酶活性的分离多肽，这些分离多肽选自下组，该组由以下各项组成：

(a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60%序列一致性的一种多肽；

(b)在中等严格条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列，(ii)其基因组DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长补体杂交的多核苷酸编码的一种多肽；

(c)与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或其基因组DNA序列具有至少60%序列一致性的多核苷酸编码的一种多肽；

(d)在一个或多个(例如若干个)位置处包含一个取代、删除、和/或插入的SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体；以及

(e)具有纤维素酶活性的(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的一个片段。

本发明还涉及包含选自下组的GH9催化结构域的分离多肽，该组由以下各项组成：

(a)与SEQ ID NO:2的氨基酸1至428具有至少60%序列一致性的一个催化结构域；

(b)在中等严格条件下与(i)SEQ ID NO:1的核苷酸12至1295，(ii)其基因组DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长补体杂交的多核苷酸编码的一个催化结构域；

(c)与SEQ ID NO:1的核苷酸12至1295或其基因组DNA序列具有至少60%序列一致性的多核苷酸编码的一个催化结构域；

(d)在一个或多个(例如若干个)位置处包含一个取代、删除、和/或插入的SEQ ID NO:2的氨基酸1至428的变体；以及

(e)具有纤维素酶活性的(a)、(b)、(c)或(d)的GH9催化结构域的一个片段。

本发明还涉及编码本发明的多肽的分离的多核苷酸；核酸构建体；重组表达载体；包含这些多核苷酸的重组宿主细胞；以及产生这些多肽的方法。

本发明还涉及包含本发明的纤维素的组合物，特别是洗涤剂组合物，以及用于织物处理和用于纸浆与纸处理的组合物。

附图简要说明

图1示出对于纤维素酶的pH最佳值，使用具有还原糖试验的PASC确定。该酶展示广泛的pH最佳值并且对于此酶，最佳pH值为6。从pH6至9，活性为超过80%的最大活性。菱形，PASC+酶；三角形，PASC–酶。

图2示出蛰龙介属魔玉虫的温度曲线，在0.1M磷酸钠，pH7的0.2%AZCL-HE-纤维素上确定。

图3示出与两种商品，Endolase和Whitezym相比，蛰龙介属纤维素酶的洗涤性能，柱标记为U33M5。

定义

纤维素酶：术语“纤维素酶”是指催化β-1,4-葡聚糖中连接两个葡糖基残基的β-1,4-键水解的内切β-1,4-葡聚糖酶活性(EC3.2.1.4.)。为了本发明的目的，根据实例中描述的程序确定纤维素酶活性。

本发明的多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的纤维素酶活性的至少20%，例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、或至少100%。