[发明专利]含反式剪接核糖酶及治癌基因的重组腺病毒及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及含反式剪接核糖酶及治癌基因的重组腺病毒及其用途，尤其涉及一种含作用于癌细胞特异基因的对反式剪接核糖酶(trans-splicing ribozyme)-HSVtk复合体进行编码的多核苷酸(polynucleotide)及治癌基因的重组腺病毒，作为有效成分含所述重组腺病毒的防癌或治癌医药合成物，以及治癌方法，所述治癌方法包括把所述重组腺病毒或医药合成物投入所需个体的步骤。

背景技术

癌症是韩国死亡原因排名第一的重大疾病，为了征服癌症，目前为止人类做了很多研究，但还没有完全征服，是难以治疗的病症。癌症治疗方法有传统的手术、化学疗法及放射疗法等，但各种疗法局限性大。因此，目前研究之外的一些治疗方法，其中基因疗法可以说研究得特别多。

基因治疗(gene therapy)是指针对很难通过普通方法治疗的先天性或后天性基因异常，以基因工学方法进行治疗的方法。具体地，基因治疗为了防治先天或后天基因缺陷、病毒性疾病、癌症或心血管疾病等慢性疾病，向体内投入DNA及RNA等遗传物质，让治疗蛋白表达或抑制特定蛋白表达，对疾病的原因从基因层面解释，可以根治疾病，不仅可以克服疑难杂症，还可望成为替代现有医疗方式的有效手段。

癌症的基因治疗可再分为诱发人体内免疫反应的免疫学基因疗法及利用基因直接破坏癌细胞或诱导其灭亡的基因疗法。后者来说，把基因搬运到细胞内部并使之表达(expression)的载体(vector)作用非常重要，腺病毒的载体由于基因传达效率高、向未分化细胞传达基因的能力强、可制造高值效价病毒储藏物的性能，被认为是最有希望的基因治疗载体之一。

通常使用的基因治疗腺病毒载体放入删除复制必需的一连串基因、启动子(promoter)活性水平高的巨细胞病毒(cytomegalovirus：CMV)或劳氏肉瘤病毒(Rous sarcoma virus：RSV)启动子，在生物体内以很高的效率表达治疗目的蛋白。

然而用于基因治疗的标志基因很多在经常做细胞分裂的普通细胞上也会表达，产生副作用。为了降低这种副作用，目前试图尝试癌细胞特异性治疗（cancer tissue targeted therapy）（Fukuzawa et al.,Cancer Res64：363-369，2004）。为此代替CMV或RSV，考虑使用组织特异性(tissue-specific)启动子，而该方法虽然可以提高特异性但会降低疗效，很难达到实用要求。

为了解决所述缺点，目前正在研究使用组织特异性启动子以外的因子，开发组织特异性治癌腺病毒，其中代表性的有使用反式剪接核糖酶等的方法。

所述利用反式剪接核糖酶的组织特异性治癌腺病毒开发相关研究，探明了嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)的I组内含子(intron)核糖酶不仅在试验管内执行反式剪接反应，还在人体细胞内执行该反应，连接分别独立存在的两个转转录体，从而受到广泛瞩目。

具体地，以这种I组内含子为基础的反式剪接核糖酶以只在与疾病相关的基因转录体或疾病细胞表达的特定RNA为目标，补正这些，使它们成为正常RNA，或者诱发重编、使它们置换为新的治疗用基因转录体，预计会成为兼具疾病特异性及安全的基因治疗技术。另外，反式剪接核糖酶去除疾病特意RNA的同时，可以诱导出我们需要的治疗用基因产物的表达，可以加大治疗效果。

特别是，随着最近研究成果发现可捕捉在癌组织起特异性作用的hTERT（human Telomerase reverse transcriptase)为标志的反式剪接核糖酶，大家利用此开发癌治疗剂的研究越发活跃，但目前为止还没有显著的结果。