[发明专利]限制增殖型腺病毒

说明书

技术领域

本发明涉及一种新型限制增殖型腺病毒及含有其的癌细胞的检测用试剂或癌的诊断用试剂。

背景技术

目前，作为癌的诊断方法，主要使用(i)使用MRI等大型检查设备的方法和(ii)测定血液中的肿瘤标记等的方法，简便且患者负担较少的方法(ii)备受期待。特别是从在癌患者的外周血液中循环的癌细胞(循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells：CTC))显示与提高全身转移的危险性及确认到CTC的患者的预后显著低等临床症状密切的关系的方面考虑，期待开发一种简便且高灵敏度地检测作为预后的预测因子或替代标记的CTC的方法。

作为检测CTC的方法，使用以EpCAM(上皮细胞粘附分子)或细胞角蛋白-8等癌相关抗原检测的方法(细胞检验系统等)及RT-PCR等检测方法。但是，由于这些癌相关抗原即使在正常的上皮细胞中也会表达，因此，检测出假阳性的可能性较高，另外，从在PCR法中在癌细胞中无法同时观察特征性的细胞形态等、灵敏度及简便性、准确性、成本的观点考虑，寻求新的方法。

另一方面，本发明人以前开发了一种癌细胞特异性地增殖且表达GFP的限制增殖型腺病毒(GFP-表达限制增殖型病毒(GFP-expressing Conditionally Replicating Adenovirus)：GFP-CRAd)(称为TelomeScan(注册商标)、OBP-401或Telomelysin-GFP)(专利文献1：WO 2006/036004)。而且，开发了一种使用该TelomeScan的简便地检测CTC的方法(非专利文献1：Kojima T.,et al,J.Clin.Invest.,119；3172,2009)。

然而，TelomeScan具有5型腺病毒的纤毛蛋白(ファイバータンパク質，fiber protein)，经由靶细胞的柯萨奇病毒和腺病毒受体(Coxsackievirus and adenovirus receptor，CAR)感染，因此，有可能不会感染未表达CAR的细胞。特别是已知渗透、转移及增殖能力较高且恶性度较高的癌细胞的CAR的表达降低(非专利文献2：Okegawa T.,et al,Cancer Res.,61：6592-6600,2001)，但TelomeScan有可能无法检测这些恶性度较高的癌细胞。另外，虽然可能性较低，但TelomeScan感染正常的血液细胞(例如白血球)而增殖，表达GFP，由此也认为会产生假阳性。

因此，寻求检测包括CAR阴性的几乎全部的癌细胞，且在正常的血液细胞中不会产生假阳性的癌细胞的检测用试剂及癌的诊断用试剂。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO 2006/036004

非专利文献1：Kojima T.,et al,J.Clin.Invest.,119：3172,2009

非专利文献2：Okegawa T.,et al,Cancer Res.,61：6592-6600,2001

发明内容

发明要解决的问题

本发明鉴于这样的状况进行，其所要解决的问题在于，提供一种检测出包括CAR阴性细胞的几乎全部的癌细胞，且在血液细胞中不产生假阳性癌细胞的检测用试剂及癌的诊断用试剂，以及提供一种作为这样的试剂有用的限制增殖型重组腺病毒。

解决问题的方法

本发明人等为了解决上述问题进行了潜心研究，结果发现，通过将TelomeScan中的5型腺病毒的纤毛置换为与在几乎全部的人细胞、特别是全部癌细胞中高表达的与CD46结合的腺病毒的纤毛，不仅可以检测CAR阳性细胞，而且可以检测CAR阴性细胞。另外，通过在TelomeScan中组入利用

微RNA(miRNA)的基因控制系统，成功地做到在血液细胞中不会产生假阳性，以至完成了本发明。

即，本发明如下所述。

(1)一种多核苷酸，其依次含有人端粒酶逆转录酶启动子、E1A基因、IRES序列及E1B基因，并且含有第一微RNA的靶序列。

(2)如上述(1)所述的多核苷酸，其中，第一微RNA在非癌细胞中表达。