[发明专利]包含配体的VLP及其相关方法

说明书

关于联邦资助研究的声明

本发明根据美国国家卫生研究院（National Institutes of Health）提供的基金AI068003和UL1RR025008；和美国国家过敏症和传染病学会（National Institute of Allergy and Infectious Diseases）提供的基金1R43AI091230、1R01AI068003和1R01AI087798，在政府的支持下进行。政府具有本发明的某些权利。

相关申请的交叉引用

本申请要求2011年8月1日提交的美国临时申请号61/513,695、2011年8月1日提交的美国临时申请号61/513,905、和2011年8月26日提交的美国临时申请号61/527,636的优先权，所有这些申请通过引用全文并入本文。

背景

病毒样颗粒(VLP)疫苗是遗传改造的颗粒病毒样结构的多拷贝蛋白抗原的复合体。以VLP或重组疫苗呈现的病毒蛋白是免疫原性的。产生VLP的方法在美国专利申请公布号2006/02167702中提供。还参见美国专利申请公布号2006/0088909、2010/0047277、2010/0196419、2010/0330190、2011/0097358、2012/0052082、和美国专利7,763,450。

流感是人类最重要的病毒性疾病之一，具有显著的医学和经济负担。接种疫苗是预防流感感染的有效方法。可获得的季节性流感疫苗是三价灭活的(杀死的)病毒疫苗(TIV)或活的、减毒的、三价流感病毒疫苗(LAIV)。这些疫苗被靶向以主要针对与用于接种的病毒同源的毒株的病毒包膜蛋白HA以及NA诱导中和抗体。然而，流感病毒随着时间经历其表面蛋白的变化，称为抗原漂移，允许它们躲避宿主免疫系统和减少对先前感染的免疫效力。由于与疫苗毒株的抗原错配，这种漂移的毒株可危害疫苗引起的免疫，且所得的血清保护比可根据疫苗毒株与循环毒株之间的抗原距离而改变。此外，漂移的毒株的意外出现(由HA亚型和较不频繁地NA亚型被新的亚型代替造成)可导致流感流行。现有疫苗的主要缺陷包括需要每个季节产生新的疫苗、选择正确毒株的不确定性、长的生产时间、以及疫苗通过需要含胚卵的缓慢过程制备的事实。而且，现有的疫苗不针对未来的流感流行进行保护。因此，不仅对于季节性流感，而且对于可能的新的流感流行毒株都需要改进的疫苗。

因为现有疫苗的这些缺陷，基于相对保守的蛋白结构域的通用疫苗将是有希望的方法。前提是抗体对传染性病毒颗粒、完整的受感染细胞、或二者上这些结构域的可及性。甲型流感病毒的M2蛋白是四聚III型膜蛋白，展现pH依赖性质子运输活性。它以高密度在受感染细胞的质膜上表达，且其保守的细胞外结构域(M2e)是M2e特异性抗体可及的。然而，因为仅M2的数个拷贝被掺入流感病毒的包膜中，且小的M2e被大的表面HA和NA隔离不与免疫效应细胞有效相互作用，M2e是免疫原性差的，尽管其是高度保守的。研究已经显示，尽管M2e特异性抗体不能阻止感染，它们限制随后的病毒复制并减少生病和死亡。参见Treanor等人,J Virol,1990,64(3):1375-7。

细菌鞭毛抗原鞭毛蛋白是Toll样受体(TLR)5的天然配体。而且，其可被胞内受体Ipaf识别。当与抗原一起以物理相关形式或在混合物中共施用时，其可用作佐剂。作为蛋白佐剂，鞭毛蛋白可被遗传修饰以产生不同的疫苗制剂。已经知道，在沙门氏菌的大多数分离株中，两种基因编码鞭毛抗原。FliC编码I相鞭毛蛋白FliC，且fljB编码II相鞭毛蛋白FljB。这些基因通过相变化(phase-variation)机制协同表达。FliC和FljB二者共有形成鞭毛细丝骨架的保守的N和C末端，并包含被细胞表面TLR5和胞质Ipaf识别的基序。