[发明专利]蛋白质合成试剂盒以及使用自动纯化设备表达和纯化蛋白质的方法

权利要求书

1.蛋白质合成方法，所述方法包括：

(1)制备无细胞蛋白质合成的模板；

(2)将所述模板添加至无细胞蛋白质表达溶液以表达蛋白质；

(3)将与亲和标签偶联的磁颗粒添加至所述经表达的蛋白质，以将目标蛋白与所述磁颗粒连接；以及

(4)将所述连接的目标蛋白与所述磁颗粒分离；

其中在使用自动生物材料纯化装置的自动系统中同时进行所述目标蛋白的表达和纯化，所述自动生物材料纯化装置包含：加热部件；和磁场施加部件。

2.权利要求1所述的方法，其中使用第二多孔板试剂盒420′和第一多孔板试剂盒420，所述二多孔板试剂盒420′包含：

(a)用于稀释所述无细胞蛋白质合成的模板的溶液；

(b)用于从所述模板表达所述目标蛋白的无细胞蛋白质表达溶液；以及

所述第一多孔板试剂盒420包含：

(c)用于将所述目标蛋白连接至所述磁颗粒的磁颗粒溶液；

(d)用于所述目标蛋白的洗脱溶液，

(e)用于将所述目标蛋白与所述磁颗粒偶联的磁颗粒反应溶液和洗涤溶液。

3.权利要求1所述的方法，其中所述无细胞蛋白质合成的模板是具有环状形式或线性形式的脱氧核糖核酸(DNA)。

4.权利要求3所述的方法，其中通过以下产生所述具有线性形式的DNA：通过使用制备的用于扩增目标基因并提供5′和3′端之重叠序列的引物组在样品中扩增目标基因来获得初始反应物，以及

使用含有以下组合物A的PCR预混物再次扩增所获得的初始反应物，

[组合物A]

(a)定位在所述目标基因的5′和3′两端的上游盒组和下游盒组，以及

(b)在所述盒组的5′和3′两端具有重叠序列的第二引物组。

5.权利要求4所述的方法，其中所述组合物A含有0.1ng／μl至0.5ng／μl的用于在所述目标基因之5′和3′两端编码亲和标签的盒组，以及各0.1pmole／μl至1.0pmole／μl的在所述盒组之5′和3′端具有重叠序列的第二正向引物和第二反向引物。

6.权利要求4所述的方法，其中所述亲和标签是组氨酸。

7.权利要求1所述的方法，其中所述磁颗粒含有金属离子。

8.权利要求7所述的方法，其中所述金属离子是镍离子。

9.权利要求1至8中任一项所述的方法，其包括：

注入步骤S10，将所述无细胞蛋白质合成的模板注入多孔板试剂盒420′的单元孔。

第一混合步骤S20，将注入多孔板试剂盒420′的单元孔以稀释模板的DEPC蒸馏水与注入的模板混合；

第二混合步骤S30，将无细胞蛋白质表达溶液与所述第一混合步骤的混合物混合；

混合物制备步骤S40，通过将所述第二混合步骤的混合物与细胞破裂液混合来制备蛋白质合成反应溶液；

加热步骤S50，通过使用加热部件720加热具有所述混合物的多孔板试剂盒420′之特定单元孔的下部来对在所述特定单元孔中的蛋白质合成反应溶液施加热，

磁颗粒反应混合物的制备步骤S70；

蛋白质表达物注入步骤S110，将注入多孔板试剂盒420′之单元孔的蛋白质表达物注入所制备的磁颗粒反应混合物中；

反应步骤S120，使注入多孔板试剂盒420′之单元孔的所述蛋白质表达物与所述磁颗粒反应；

移除步骤S140，通过对含有所述蛋白质表达物的混合物施加磁场来移除除磁颗粒和与磁颗粒偶联之蛋白质之外的混合物；

洗涤步骤S150，通过将注入多孔板试剂盒420之单元孔的洗涤溶液注入来洗涤除来自磁颗粒之目标蛋白之外的杂质；

移除步骤S170，通过对含有混合物的洗涤溶液施加磁场来从含混合物的洗涤溶液中移除除连接目标蛋白的磁颗粒之外的混合物；

目标蛋白分离步骤S180，通过将注入多孔板试剂盒420之单元孔的目标蛋白洗脱溶液注入从所述移除步骤获得的混合物中来分离所述目标蛋白；以及

含有目标蛋白的溶液的获得步骤S200，通过对混合物施加磁场来从含有自磁颗粒分离之目标蛋白的目标蛋白洗脱溶液中获得除磁颗粒之外的含有目标蛋白的溶液。