[发明专利]包含胰液的生物试样中的目标粒子的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及使用共聚焦显微镜、多光子显微镜的光学系统等能够检测到来自溶液中的微小区域的光的光学系统来检测包含胰液的生物试样中的目标粒子的方法。

本申请基于2011年8月30日在日本提交的日本特愿2011-187601号主张优先权，本文援引其内容。

背景技术

随着近年来光学测量技术的发展，使用共聚焦显微镜的光学系统和能够进行光子计数(单光子检测)的超高灵敏度的光检测技术，能够检测以及测定单光子或单分子荧光水平的微弱光。因此，提出了使用这样的微弱光的检测技术，进行生物分子等分子间相互作用或者分子间的结合/解离反应的检测的各种装置或方法。

例如，对于荧光相关光谱分析(Fluorescence Correlation Spectroscopy：FCS。例如，参见专利文献1、2、非专利文献1～3)中，使用激光共聚焦显微镜的光学系统和光子计数技术，对于来自进出试样溶液中的微小区域内的荧光分子或被荧光标记的分子(荧光分子等)的荧光强度进行测定。确定由该测定的荧光强度的自相关函数的值确定的微小区域内的荧光分子等的平均滞留时间(平移扩散时间)以及滞留的分子个数的平均值。基于该微小区域内的荧光分子等的平均滞留时间以及滞留的分子个数的平均值，能够获得荧光分子等的运动速度或大小、浓度这类信息。进而，也能够检测到分子的结构或大小的变化、分子的结合/解离反应或分散/聚集的各种现象。需要说明的是，前述微小区域是指显微镜的激光束被聚光的焦点区域，被称为共焦体积。

此外，提出有利用荧光强度分布分析(Fluorescence-Intensity Distribution Analysis：FIDA。例如，专利文献3)或光子计数直方图(Photon Counting Histogram：PCH。例如，专利文献4)，与FCS同样地，生成检测到的出入共焦体积内的荧光分子等的荧光强度的直方图。接着，通过对该直方图的分布拟合统计学模型式，计算荧光分子等固有的明亮度的平均值和共焦体积内滞留的分子个数的平均值。接着，根据这些信息，能够推定分子结构或大小的变化、结合/解离状态、分散/聚集状态等。

进而，专利文献5、6中提出了：基于使用共聚焦显微镜的光学系统测定出的试样溶液的荧光信号的时程来检测荧光性物质的方法。专利文献7中提出了一种信号运算处理技术，其用于：使用光子计数技术，测量在流式细胞仪内流过的荧光微粒或固定在基板上的荧光微粒所发出的微弱光，检测液流中或基板上存在的荧光粒子。

特别是，通过应用FCS、FIDA等、使用了共聚焦显微镜的光学系统和光子计数技术的微小区域的荧光测定技术的方法，测定所必需的试样的浓度比以前低得多且可以是微量(每次测定使用的量最多数十μL左右),测定时间也大幅地缩短(每次测定中可重复进行数次的秒数量级时间的测定。)。因此，特别在对于医学和生物学的研究开发领域中经常使用的稀少或高价的试样进行分析的情况下或者在疾病的临床诊断、生理活性物质的筛选等被检体多的情况下，这些技术与现有的生物化学的方法相比较，可以期待能够成为低廉或迅速地进行实验或检测的强有力的工具。

在医疗诊断中，体液为用于了解脏器状态的重要的生物试样。作为该体液的一种的胰液也是用于了解胰脏状态的重要的生物试样，应用于细胞诊断以及各种生物分子的测定等检査、研究中。例如，期待能够通过检测胰液中的肿瘤标记物诊断胰脏癌的发病。

在以胰液为代表的生物试样中，通常包含有多种多样的物质，包含具有自身荧光的物质的情况也很多。也有利用生物试样中的自身荧光的检测方法。例如，正在研究一种诊断装置，其利用的是：通过激发光的照射使病变组织和正常组织产生的自身荧光的强度分布产生差别，检测由生物试样产生的自身荧光，分析该自身荧光而识别伴随着各种疾病的组织性状的变化。在通过激发光的照射由生物组织产生的自身荧光的波长区域的长波长侧，存在有根据生物的组织性状的差异而显示出极大强度差异的波长区域。但是，由生物组织产生的自身荧光的最大强度存在于480nm附近的短波长侧的波长区域，长波长区域的自身荧光的强度是微弱的。为了更加正确地检测出该微弱的长波长区域的自身荧光的强度，提出有例如专利文献8所述的装置。在该装置中，同时地对生物组织照射：使生物组织产生自身荧光的第1激发光、和具有通过该激发光的照射由生物组织产生的自身荧光的波长区域的中间波长带的波长的第2激发光。由此，长波长侧的波长区域的自身荧光的发光强度被提高。其结果，能够使该长波长侧的波长区域的自身荧光中所混入的干扰成分的比例相对地减少。