[发明专利]用于对样品中的稀少目标细胞进行细胞计数检测的方法和组合物

说明书

相关申请的交叉引用

根据35U.S.C.§119(e)，本申请案要求2011年9月6日提交的美国临时专利申请序列号61/531,575的提交日期的优先权；将该申请案的披露通过引用结合于此。

简介

流式细胞术是研究中被很好接受的工具，它允许用户对样品流体中的组分进行快速分析和分类。流式细胞计数器使用一种载液（例如，鞘液（sheath fluid））以使样品组分（基本上一次一个组分）通过一个照射区。通过光源（例如激光）对每个样品组分进行照射，并且对由每个样品组分散射的光进行检测并分析。这些样品组分可以在它们退出照射区时基于它们的光学和其他特征来分离。

循环肿瘤细胞（CTC）是从肿瘤流出进入受试者血流中的细胞。一旦在血液中，这些细胞可以循环通过受试者的身体，在体内它们可以入侵其他组织并且生长出新的肿瘤。因此CTC牵涉到转移，转移是患有癌症的受试者中死亡的主要致因。对CTC进行计数的努力已经通过以下事实受到妨碍：CTC极其难以检测，它们是异常稀少的，并且难以将其与健康细胞区分开来。用于检测CTC的现存方法在敏感性和/或特异性方面具有限制，导致许多健康细胞被错误表征为癌性的，并且许多癌细胞在分析中漏掉。

概述

本披露提供了用于对一个样品中的稀少目标细胞进行检测的细胞计数方法。在某些方面，这些方法可以协助对生物样品（血液）中的稀少目标细胞（例如，循环肿瘤细胞（CTC））进行检测。这些方法的方面包括使该样品与特异性地结合至该稀少目标细胞的一种标志物的第一和第二结合成员接触，并且针对包括结合的第一和第二结合成员的细胞的存在对该样品进行细胞计数测定以检测在该样品中的该稀少目标细胞。还提供了用于实践这些主题方法的系统、组合物、以及试剂盒。

感兴趣的稀少目标细胞包括但不限于原核细胞（例如，细菌细胞或古细菌细胞）以及真核细胞（例如，哺乳动物细胞，例如神经细胞、肌细胞、上皮细胞（例如，循环肿瘤细胞）、干细胞（例如，造血干细胞）、脂肪细胞等等）。稀少目标细胞可以从一个范围的样品来检测，这些样品包括获得自体外来源（例如，来自培养生长的实验室细胞的细胞悬浮液）或来自体内来源（例如，哺乳动物受试者、人类受试者、等）的样品。

各种结合成员可以用于实践这些主题方法。结合成员可以特异性地结合至稀少目标细胞的一种标志物。感兴趣的标志物可以包括但不限于CD1a、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD10、CD11b、CD13、CD14、CD15、CD16、CD19、CD20、CD22、CD23、CD25、CD30、CD33、CD34、CD38、CD41、CD45、CD56、CD57、CD59、CD61、CD64、CD71、CD74、CD79a、CD90、CD103、CD117、CD133、CD138、CD271、CD303、CD304、bcl-2、C-kit、TdT、FMC7、SCA-1、血型糖蛋白A、细胞角蛋白、EpCAM、EphB4、EGFR、CEA、HER2以及MUC-1。在某些方面，标志物可以位于稀少目标细胞的表面上、和/或稀少目标细胞内部。可以对有核细胞进行透化以允许第一和第二结合成员结合至细胞内标志物。在主题方法的某些方面，样品中的非稀少细胞没有进行染色（例如，对于CD45没有被染色）。