[发明专利]用于检测液态介质中纤溶酶原的方法、相关组合物及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及用于检测试样中纤溶酶原的方法，具体的涉及通过液体试剂来检测试样中纤溶酶原的方法，更具体的涉及通过可以长期保存的即用型试剂来检测试样中纤溶酶原的方法。

此类检测要求激活试样中的纤溶酶原，这一般是利用链激酶来实现的。

关于此点，溶液由链激酶和链激酶激活剂（纤维蛋白原）组成。但是，纤维蛋白原难以以液体形态保存，导致检测结果会随着纤维蛋白原的保存时间做函数变化。

背景技术

因此，为了克服以上缺陷，第5879823号美国专利公开了一种利用氨基酸确定的寡肽来进行稳定的纤溶酶溶液。该溶液并不完全令人满意，因为它仅局限于所述纤溶酶溶液的稳定，而不适用于纤溶酶原激活剂溶液（如纤维蛋白原）的稳定。另外，该溶液也无法满足利用在病人抽血很久之前制备的即用型液体制剂对患者血液中存在的纤溶酶原进行检测的需要。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷并具体的提供用于检测试样中纤溶酶原的方法，所述方法包括以下步骤：     

a 将反应物i，即链激酶和链激酶激活剂，与反应物ii，即校核液或稀释血浆试样，进行反应；     

b 利用反应追踪物（SPm）来追踪所述反应;     

c 确定所述校核液或稀释血浆试样中纤溶酶原的量，将其作为所述反应追踪结果的函数。

在优选具体实施方式中，所述方法由以上步骤组成。

根据本发明的方法中所使用的链激酶激活剂为一种或多种化合物，所述化合物选自纤维蛋白DD片段和/或DD片段衍生物组成的组。所述的DD（或D-二聚体）片段，是指含有两个来自不同纤维蛋白原（fibrogen）分子的交叉连接D区域的纤维蛋白的次级片段，其可通过例如纤维蛋白酶解法来获得。

因此，本发明所使用的DD片段可以来自纤维蛋白或裂解的血凝块。也可以使用重组DD片段。还可以使用不纯DD片段，例如纤维蛋白降解碎片。所述DD片段衍生物是指包括至少某些上述DD片段的分子，特别是链激酶激活过程中所涉及的DD片段的氨基酸。在优选具体实施里中，所述衍生物与所述DD片段具有至少70%的序列一致性，更优选的具有至少80%的序列一致性，最优选的具有至少90%或95%以上的序列一致性。

在一个优选实施方式中，所述DD片段衍生物可以包括例如比DD片段更多的氨基酸并且包括例如D-二聚体/片段E复合物。

所述反应追踪物或化合物（SPm）可以为例如接枝在基材、链激酶和链激酶激活剂形成的酶产物或所述酶上的分子。所述接枝可以通过例如化学合成来进行。所述反应追踪物或化合物（SPm）也可以为能够与基材、所述酶的产物或所述酶相连的分子。

被选定的所述追踪物或化合物能够通过例如生成颜色或荧光或导致颜色或荧光消失或是通过改变所述反应介质的吸光度来追踪所述酶的反应。

在优选具体实施方式中，反应追踪化合物为专门用于纤溶酶和纤溶酶-链激酶复合物的显色基材。此类化合物在本领域内已知的例子包括但不限于由Chromogenix出售的S-2403^TM和S-2251^TM以及Hyphen Biomed公司出售的SPm41。

在优选具体实施方式中，所述反应可以在抗凝剂存在的情况下进行，所述抗凝剂优选的为水蛭素或任何其它凝血酶抑制剂。

优选的，所述方法包括在反应步骤a之前的将所述链激酶激活剂存放在即用型溶液中的步骤。因此，所述方法并不要求在使用前才制备链激酶激活剂溶液。另外，所述链激酶激活剂在溶液中处于稳定状态并可与例如链激酶共同保存，而不会改变其理化性质和在所述纤溶酶原检测进行中的效能。在优选具体实施方式中，所述链激酶和链激酶激活剂可以共同封装。

在优选具体实施方式中，所述链激酶激活剂存放步骤在温度处于-20℃和37℃之间时进行。在优选具体实施方式中，所述链激酶激活剂的存放温度为2-10℃，更优选的为4-8℃。在优选具体实施方式中，所述链激酶激活剂适于存放在室温下或不要求特定存放条件。

根据本发明的一个具体实施方式，所述存放步骤可以持续12小时以上，优选的持续24小时至24个月，更优选的持续24小时至18个月。

作为可选项，所述链激酶激活剂在防腐剂和/或抗生素（如环丙沙星）存在的情况下存放。

优选的，所述方法还包括在所述反应步骤a之前将所述链激酶（R1）和链激酶激活剂保持在约37℃的预温育(pre-incubation)步骤。