[发明专利]含有胰液成分的生物试样中的蛋白酶的抑制方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于抑制含有胰液成分的生物试样中的蛋白酶的酶活性的方法，对胰液或十二指肠液中的来自胰液的成分的分解的抑制有效的蛋白酶抑制剂、及含有该蛋白酶抑制剂的胰液等生物试样保存用试剂盒。

本申请基于2011年9月13日在日本提出的日本特愿2011-199357号主张优先权，在此引用该内容。

背景技术

体液是用于获知脏器状态的重要的生物试样。胰液也是用于了解胰腺状态的重要的生物试样，可以用于细胞诊断、碳酸氢盐测定、细菌检查、由蛋白质和/或核酸等组成的标志物的检查等。在研究中，也在广泛进行胰腺癌等胰腺相关疾病的新标记物的探索。

由于胰液是消化液，因此含有各种各样的消化酶。已经知道这些消化酶虽然在胰腺内以非活性状态存在，在排出到十二指肠后活化。胰液中的消化酶，在由十二指肠上皮细胞分泌的小肠肠激酶的作用下，进行分解级联反应。已知胰液中含有的胰蛋白酶原在小肠肠激酶的作用下活化，变成胰蛋白酶，进而该胰蛋白酶成为诱因，将胰凝乳蛋白酶原、酯酶原等各种消化酶(蛋白酶)活化。另外，据说胰蛋白酶原占胰液总蛋白量的约12%左右(例如，参照非专利文献2)。通过这些各种消化酶的活化，胰液中含有的蛋白质、核酸、脂质、细胞等生物分子在排出到十二指肠之后被分解、变性。因此，在对排向十二指肠的胰液进行细胞检查、生物分子测定等检查、研究发挥作用的场合，担心胰液中的作为目的物的细胞、蛋白质等会受到蛋白酶的影响，导致不能进行准确地测定。因此，如何抑制排出到十二指肠的胰液中的蛋白酶活性变得重要。

作为以往为使胰液、十二指肠液中的各种分解酶的活性降低的方法之一，已有将采集到的胰液在冷却状态下保存，通过避开酶活性的最适温度来抑制活性的方法。一般而言，需要将采集到的胰液等立即置入冰中，并且，也需要迅速对该胰液等进行检查(例如，参照非专利文献1)。但是，在该方法中，一旦胰液等的温度升高，有可能再次进行酶反应。因此，通常使采集到的胰液总是保存在低温下，处理繁杂。此外，根据蛋白质的种类不同，即使是低温有时也会进行分解，因此单纯在低温下保存，对于抑制来自胰液成分的分解/变性等是不充分的。

已经公开为了测定胰液中的蛋白质，在于内窥镜下采集到的胰液0.5mL中添加抑肽酶0.2mL进行冷冻保存的方法(例如，参照非专利文献2)。通过冷冻保存，在保存期间内可以抑制胰液中几乎全部的蛋白酶的活性，可以稳定保存该胰液中的细胞、蛋白质等。但是，冷冻保存的胰液需要在测定前进行溶解，有时会再次进行溶解后的细胞、蛋白质等的分解。并且，在冷冻保存中作为解析对象的分子本身也有可能受损。

此外，作为保存生物试样、特别是保存血液的方法，已经公开在含有至少两种以上的蛋白酶抑制剂的容器中直接采集血液的方法（例如参见专利文献1。）。通过使采集到的血液立即与蛋白酶抑制剂接触，可以防止血液中的蛋白质的分解等。在该方法中，使用丝氨酸蛋白酶抑制剂和其他蛋白酶抑制剂，例如，将血液采集到含有AEBSF、抑肽酶、亮抑酶肽等丝氨酸蛋白酶抑制剂和E-64等半胱氨酸蛋白酶等的容器中。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第4496407号公报

非专利文献

非专利文献1：勝沼等1人、“分析”、1978年、第10卷、第682～689页。

非专利文献2：横山等8人、Pancreas、2002年、第24卷、第4号、第344～347页

发明内容

发明要解决的问题

为了使采集到的胰液、十二指肠液等稳定且容易处理，可以认为与专利文献1中所记载的方法同样地在采集到的体液中添加蛋白酶抑制剂的方法是有用的。

但是，在血液中和胰液中含有的蛋白酶的种类差异很大。因此，即使在胰液、十二指肠液等含有胰液成分的体液中添加专利文献1中记载的有效地降低血液中的蛋白酶活性的蛋白酶抑制剂，也不能抑制该体液中的蛋白酶的活性。

本发明的目的在于，提供能够有效抑制胰液、十二指肠液等含有胰液成分的生物试样中的蛋白酶活性的蛋白酶抑制剂，使用该抑制剂的含有胰液成分的生物试样中的蛋白酶的抑制方法及含有该蛋白酶抑制剂的胰液等生物试样保存用试剂盒。

用于解决问题的方案

本发明人等为了解决上述课题进行了锐意研究，结果发现具有氟磺酰基的蛋白酶抑制剂对胰液中含有的蛋白酶的活性抑制效果最高，从而完成了本发明。