[发明专利]靶核酸的检测方法

权利要求书

1.一种方法，其为根据核酸色谱法的靶核酸检测方法，

其具备：

杂交步骤，使与1个或2个以上靶核酸关联的1个或2个以上的部分双链核酸、和固相载体上与所述1个或2个以上靶核酸关联的1个或2个以上的探针，通过核酸色谱法在可杂交的条件下进行接触；

检测步骤，检测所述杂交步骤中产生的杂交产物；

对于所述1个或2个以上部分双链核酸，第1条链的5’末端侧上具有作为单链标记部分的可以与所述探针特异性杂交的标记序列，并且至少一部分上具有标识物质或标识物质结合物质。

2.根据权利要求1记载的方法，所述部分双链核酸在第2条链的5’末端侧上具有所述标识物质或所述标识物质结合物质。

3.根据权利要求1或2记载的方法，所述杂交步骤之前，具备使用第1引物和第2引物，对靶核酸实施扩增反应得到所述部分双链核酸作为扩增产物的扩增步骤，其中所述第1引物含有所述标记序列和识别所述靶核酸第1碱基序列的第1识别序列，在所述标记序列和所述第1识别序列之间具有可以抑制或停止DNA聚合酶反应的连结部位；所述第2引物具有识别所述靶核酸第2碱基序列的第2识别序列和所述标识物质或所述标识物质结合物质。

4.根据权利要求1或2记载的方法，所述杂交步骤之前，具备使用第1引物、第2引物I和第2引物II，对靶核酸实施扩增反应得到所述部分双链核酸作为扩增产物的扩增步骤，其中所述第1引物含有所述标记序列和识别所述靶核酸第1碱基序列的第1识别序列，在所述标记序列和所述第1识别序列之间具有可以抑制或停止DNA聚合酶反应的连结部位；所述第2引物I含有标识用序列和识别所述靶核酸中第2碱基序列的第2识别序列；所述第2引物II含有所述标识物质或所述标识物质结合物质和所述标识用序列。

5.根据权利要求1或2记载的方法，所述杂交步骤之前，具备使用第1引物、第2引物I，在含有所述标识物质或所述标识物质结合物质和与所述标识用序列特异性杂交的序列的标识用探针的存在下，对靶核酸实施扩增反应得到部分双链核酸与所述标识用探针的复合物的扩增步骤，其中所述第1引物含有所述标记序列和识别所述靶核酸第1碱基序列的第1识别序列，在所述标记序列和所述第1识别序列之间具有可以抑制或停止DNA聚合酶反应的连结部位；所述第2引物I含有标识用序列和识别所述靶核酸中第2碱基序列的第2识别序列。

6.根据权利要求1记载的方法，所述部分双链核酸的双链部分上具备所述标识物质或所述标识物质结合物质。

7.根据权利要求1或6记载的方法，所述杂交步骤之前，具备使用第1引物和第2引物、同时使用包括具备所述标识物质或所述标识物质结合物质的三磷酸核苷衍生物在内的核苷三磷酸，对靶核酸实施扩增反应得到所述部分双链核酸作为扩增产物的扩增步骤，其中所述第1引物含有所述标记序列和识别所述靶核酸第1碱基序列的第1识别序列，在所述标记序列和所述第1识别序列之间具有可以抑制或停止DNA聚合酶反应的连结部位；所述第2引物具有识别所述靶核酸第2碱基序列的第2识别序列。

8.根据权利要求1-7中任一项记载的方法，使包含扩增反应液的展开溶剂和所述固相载体的一部分接触，实施所述杂交步骤，所述扩增反应液含有所述扩增步骤后的所述扩增产物。

9.根据权利要求8记载的方法，制备包含扩增反应液和结合于所述标识物质结合物质的标识物质的所述展开溶剂，使该展开溶剂和所述固相载体的至少一部分接触，实施所述杂交步骤，所述扩增反应液含有所述扩增步骤后的所述扩增产物。

10.根据权利要求9记载的方法，实施所述扩增步骤，在保持所述扩增反应溶液的腔中至少供给所述标识物质，制备所述展开溶剂，使所述展开溶剂和所述固相载体的一部分在所述腔内接触。

11.根据权利要求1-10中任一项记载的方法，所述标识物质结合物质选自包括抗原抗体反应中的抗体和生物素、地高辛及FITC等在内的半抗原中的1种或2种以上，

所述标识物质为具备可以和标识物质结合物质结合的部位，为利用选自荧光、放射能、酶、磷光、化学发光及染色中的1种或2种以上的标识物质。