[发明专利]从血液中捕获和检测循环多发性骨髓瘤的测定法

说明书

本发明包括分离循环多发性骨髓瘤细胞的方法以及治疗被怀疑患有异常血浆细胞疾病的患者的方法。

相关申请

这个非临时性申请要求于2011年7月21日提交的美国专利申请序列号61/510,170的临时专利申请的优先权。

背景技术

多发性骨髓瘤（也已知为骨髓瘤或血浆细胞骨髓瘤）是血浆细胞的渐进血液癌症。该病症特征在于骨髓中过量数目的血浆细胞和未受损的单克隆免疫球蛋白或游离的单克隆轻链的生产过剩。

临床上，该疾病是根据多种参数诊断、分阶、和治疗的，所述参数包括基于血清和/或尿液中单克隆（或骨髓瘤）蛋白（M蛋白）的量的骨髓瘤肿瘤细胞群，和血红蛋白和血清钙浓度，基于骨肌检查和肾衰竭的存在或缺乏的溶骨性病变的数量。表征该病症的附加方法包括对骨髓检查的大于百分之十（10%）的血浆细胞检测，软组织浆细胞瘤的存在及游离κ和λ血清免疫球蛋白轻链的检测。骨髓检查是使用标准的组织学和免疫组织化学技术进行的。还进行骨髓样品的细胞遗传学检查以确定预后。接下来，由于骨髓评价是侵入式性的，如果临床需要，监测由化学和骨髓评价组成。

目前，骨髓流式细胞分析(flow cytometric analysis)被评价为疾病表征的工具并用来区分正常血浆细胞和赘生性血浆细胞病症和用来检测微量残留病(minimalresidual disease)。尽管如此，这种方法仍然依赖于一种侵入式程序。显著需要开发微创技术(less invasive technique)，以贯穿疾病过程检测、监视和表征疾病，并且血液中这些细胞的存在可提供这样的机会。

此外，需要开发更灵敏的工具用于风险的更精确评估和监视疾病前期阶段中疾病的进展，该疾病包括未明确诊断意义的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)和郁积型多发性骨髓瘤(Smoldering Multiple Myeloma）。一些研究数据表明，循环血浆细胞在疾病的前期阶段可被检测到并且可与预后关联，这支持标准化方法的使用以在疾病的早期阶段中捕获、列举和表征这些细胞。

在异常血浆细胞的识别，尤其是通过流式细胞术识别的文献（Report of theEuropean Myeloma Network on Multiparametric Flow Cytometry in MultipleMyeloma and Related Disorders，Andy C.Rawstron等人，Haematologica，2008；93(3)。）中普遍共识已包括多个主要由CD138、CD38和CD45组成的关键生物标记物。附加的生物标记物诸如CD19和CD56也已被证明在诊断中的实用性。

本发明研究了循环骨髓瘤细胞，以评价这些特定生物标记物单独或与一个或多个附加生物标记物或与FISH组合是否可用于异常循环血浆细胞的捕获和检测，包括微量残留病的检测。FISH可用于检测已在多发性骨髓瘤中描述的许多细胞遗传学异常性。在IGH基因座t(4;14)处的易位和在p53基因座del(17p)处的缺失，已被证明具有对于多发性骨髓瘤中无事件(event free)生存率和总生存率的预后价值。（Genetic Abnormalities andSurvival in Multiple Myeloma：The Experience of the InterGroupe Francophone duMyelome.Herve Avet-Loiseau等人，Blood，2007；109：3489-3495）在Poseidon目录中这些探针和多个其它多发性骨髓瘤标记物是可利用的，并可使其适合用于平台。

商业上存在使用CD138磁性颗粒的免疫磁珠选择试剂盒(immunomagneticselection kits)。干细胞技术具有可从骨髓和外周血单核细胞(PBMC)中选择CD138阳性细胞的人类CD138阳性选择试剂盒，而Miltenyi Biotech具有用于从骨髓、PBMC和全血中选择CD138阳性细胞的CD138微珠(Microbeads)。通常使用流式细胞术进行采集样本的分析。

发明内容