[发明专利]AXMI270毒素基因及其使用方法

说明书

在此提供了用于赋予针对细菌、植物、植物细胞、组织以及种子的杀虫活性的组合物和方法。提供了包含针对毒素多肽的编码序列的组合物。这些编码序列可以用在DNA构建体或表达盒中，以便用于在植物和细菌中转化和表达。组合物还包含转化的细菌、植物、植物细胞、组织、以及种子。具体地说，提供了分离的毒素核酸分子。另外，涵盖了与这些多核苷酸相应的氨基酸序列、以及与这些氨基酸序列特异性结合的抗体。具体地说，本发明提供了分离的核酸分子，这些核酸分子包含编码SEQ ID NO:3至5中所示的氨基酸序列的核苷酸序列、或在SEQ ID NO:2中列出的核苷酸序列、以及它们的变体和片段。

相关申请的交叉引用

本申请要求2011年7月28日提交的美国临时申请序列号61/512,536的权益，该申请的内容通过引用以其全部内容结合在此。

电子提交的序列表的引用

所述序列表的官方副本经由EFS-Web作为ASCII格式序列表以电子方式提交，文件名为“APA116030SEQLIST.TXT”，创建于2012年7月19日、并且具有24.9千字节大小，并且与本说明书同时提交。包含在这一ASCII格式文件中的序列表是本说明书的一部分并且通过引用以其全部内容结合在此。

发明领域

本发明涉及分子生物学领域。提供了编码杀虫蛋白的新颖的基因。这些蛋白质和编码它们的这些核酸序列在制备杀虫制剂中以及在生产转基因抗害虫植物中是有用的。

发明背景

苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）是革兰氏阳性产芽孢土壤细菌，其特征在于其产生晶状内含体的能力，所述晶状内含体特异性地对于昆虫的某些目和种具有毒性，但对于植物和其他非靶生物是无害的。因此，包含苏云金芽孢杆菌菌株或它们的杀昆虫蛋白质的组合物可用作环境上可接受的杀昆虫剂以用于防治农业昆虫害虫或者各种人或动物疾病的昆虫媒介。

来自苏云金芽孢杆菌的晶体（Cry）蛋白（δ-内毒素）具有主要针对鳞翅目、半翅目、双翅目、以及鞘翅目幼虫的有效的杀昆虫活性。这些蛋白还已经显示针对膜翅目、同翅目、虱目、食毛目、以及蜱螨亚纲害虫目（Acari pest order）、连同其他无脊椎动物目（如线虫动物门、扁形动物门、以及原生动物门肉鞭毛虫亚门）的活性（费特逊（Feitelson）（1993）在先进的经基因改造的杀虫剂中的苏云金芽孢杆菌家族树（The Bacillus Thuringiensisfamily tree In Advanced Engineered Pesticides），马塞尔·德克尔格式（MarcelDekker,Inc.），纽约，纽约州（N.Y.））。这些蛋白质最初主要基于它们的杀昆虫活性而分类为CryI至CryV。主要类别是鳞翅目特异性的（I）、鳞翅目和双翅目特异性的（II）、鞘翅目特异性的（III）、双翅目特异性的（IV）以及线虫特异性的（V）和（VI）。这些蛋白质进一步分类成亚家族；在每个家族内更高度相关的蛋白质被指定了分组字母例如Cry1A、Cry1B、Cry1C等等。在每个分组内更加密切相关的蛋白质被给予诸如Cry1C1、Cry1C2等的名称。

最近基于氨基酸序列同源性而不是昆虫靶特异性描述了Cry基因的新命名法（克里克莫尔（Crickmore）等人（1998）微生物学与分子生物学评论（Microbiol.Mol.Biol.Rev.）62:807-813）。在该新的分类中，每种毒素被指定了独特的名称，其中包括第一级（primary rank）（阿拉伯数字）、第二级（secondary rank）（大写字母）、第三级（tertiary rank）（小写字母）、以及第四级（quaternary rank）（另一个阿拉伯数字）。在该新的分类中，在第一级中，罗马数字已被换成阿拉伯数字。具有低于45%的序列同一性的蛋白质具有不同的第一级，第二和第三级的标准分别为78%和95%。