[发明专利]含聚偏氟乙烯纳米纤维的蛋白质印迹复合膜及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及含有聚偏氟乙烯(PVdF，polyvinilidenflouride)纳米纤维的蛋白质印迹(western blot)用复合膜及其制备方法，具体地涉及以通过电纺丝制成的纳米纤维网与无纺布进行复合化的形态降低生产成本，且响应特性优秀，即使存在少量的蛋白质的特定物质的情况下，也能够容易地进行检测的蛋白质印迹用复合膜及其制备方法。

背景技术

蛋白质印迹(western blot)是从多个蛋白质混合物中找出某种特定蛋白质的技术，若将从细胞或组织中提取的蛋白质与样品缓冲液(s ample buffer)相混合而放置在由丙烯酰胺(acrylamide)制成的分子筛(molecular sieve)上并进行电泳，则样品缓冲液中的被称为十二烷基硫酸钠(SDS，sodium dodecyl sulfate，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-page，sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectr ophoresis))的物质使整个蛋白质带有阴电(-)，从而使蛋白质吸引到阳电(+)侧。此时，分子筛妨碍蛋白质的进行，使得小分子移动较快，大分子移动较慢，从而形成多个大小的带(band)，此时，若在根据大小分离的凝胶(gel)上放置膜使其带电，则蛋白质以分离的状态转移到膜。在这里，上述蛋白质印迹是用X射线(X-ray)将使对要检测的特定蛋白质的抗体(antibody)结合，再次在上述抗体结合特异性的第二抗体，从而通过发色和荧光来显现的反应进行图像化的方法。

此时所使用的膜将容易与蛋白质进行疏水性结合(hydrophobic i nteraction)的硝酸纤维素(nitrocellulose)、尼龙(nylon)、聚偏氟乙烯(PVdF，polyvinilidenflouride)等用作原料，且平均微孔大小为0.2μm和0.45μm。这种膜通过如同基于在水等非溶剂中倒入溶剂和高分子来制备的相分离法(phase separation)的干式(dry)、湿式(w et)、干湿式(dry-wet casting)等方法制成，但因参与到相转化工序中的复杂的因子的影响，很难控制相分离方法，从而很难获得具有均匀的微孔分布的膜。并且，也有因微孔的形态在相分离过程中形成，从而形成无法从表面连接至背面的二维的关闭结构(closed pore)，导致难以期待高的气孔度及比表面积的问题。

最近，膜的制备方法之一的电纺丝法是在高分子溶液中利用高电压的电场来获得三维无纺布上的纳米纤维的方法。这种纳米纤维具有可控制基于纤维直径和后处理的微孔结构，且可提供高的气孔度及比表面积的优点。

到目前为止，作为利用纳米纤维的蛋白质印迹用膜的制备方法，本发明人提出了韩国公开特许第10-2011-0035454号“蛋白质印迹用纳米纤维膜及其制备方法()”、韩国公开特许第10-2011-0058957号“蛋白质印迹用一体型膜及其制备方法()”等。

但是，所提出的上述膜都是由纳米纤维单独制成或者将纳米纤维与纸贴合来制成的，当执行蛋白质印迹法时，就由纳米纤维单独制成的膜而言，在膜与蛋白质分离的凝胶之间产生气泡时，由于纳米纤维膜的僵硬度弱，因而不仅很难去除气泡，而且为了当将纳米纤维膜放置在凝胶上时，可以防止因纳米纤维的柔性及静电力而产生的纳米纤维相互之间的附着或重叠现象，而有需要规定程度的厚度的情况，因此导致存在工序费用上涨的问题。

并且，在纳米纤维与纸贴合的情况下，在甲醇预处理过程中，在因基于甲醇的聚偏氟乙烯纳米纤维和纸的膨胀率不同而产生纳米纤维从纸游离的现象，且与纳米纤维相比纸的僵硬度太大，导致在凝胶与膜的接触面产生气泡的情况下，很难去除上述气泡，从而很难执行蛋白质印迹法。

因此，需要具有均匀的微孔分布和高的气孔度，且容易去除气泡，并具有适当的柔性的蛋白质印迹用膜。本发明人对此进行了反复研究，其结果得知，将纳米纤维网与无纺布接合并进行复合化，就可以解决上述问题，从而完成了本发明。

发明内容

技术问题

因此，本发明的目的在于，将纳米纤维网与无纺布进行复合化，来提供更低廉、容易处理，且检测灵敏度得到提高的蛋白质印迹用复合膜及其制备方法。

解决问题的手段