[发明专利]用于香草醛或香草醛β-D-葡萄糖苷的生物合成的组合物和方法

权利要求书

1.一种用于生产香草醛和/或香草醛β-D-葡萄糖苷的方法，所述方法包括：

（a）提供能够生产香草醛的重组宿主，其中所述重组宿主带有编码突变体Arom多功能酶（AROM）多肽和/或突变体儿茶酚-O-甲基转移酶（COMT）多肽的异源核酸；

（b）将所述重组宿主培养足以使所述重组宿主产生香草醛和/或香草醛葡萄糖苷的时间；以及

（c）从所述重组宿主或从所述培养上清液分离香草醛和/或香草醛葡萄糖苷，由此生产香草醛和/或香草醛β-D-葡萄糖苷。

2.权利要求1的方法，其中所述突变体AROM多肽相对于野生型AROM多肽表现出降低的莽草酸脱氢酶活性。

3.权利要求1或2的方法，其中所述突变体AROM多肽包含下述突变中的一个或多个：

（a）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1349位置对齐的位置处，缬氨酸之外的氨基酸；

（b）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1366位置对齐的位置处，苏氨酸之外的氨基酸；

（c）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1370位置对齐的位置处，赖氨酸之外的氨基酸；

（d）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1387位置对齐的位置处，异亮氨酸之外的氨基酸；

（e）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1392位置对齐的位置处，苏氨酸之外的氨基酸；

（f）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1441位置对齐的位置处，丙氨酸之外的氨基酸；

（g）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1458位置对齐的位置处，精氨酸之外的氨基酸；

（h）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1500位置对齐的位置处，脯氨酸之外的氨基酸；

（i）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1533位置对齐的位置处，丙氨酸之外的氨基酸；以及

（j）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1571位置对齐的位置处，色氨酸之外的氨基酸。

4.权利要求1或2的方法，其中所述突变体AROM多肽包含下述突变中的一个或多个：

（a）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1349位置对齐的位置处的甘氨酸残基；

（b）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1366位置对齐的位置处的甘氨酸残基；

（c）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1370位置对齐的位置处的亮氨酸残基；

（d）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1387位置对齐的位置处的组氨酸残基；

（e）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1392位置对齐的位置处的赖氨酸残基；

（f）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1441位置对齐的位置处的脯氨酸残基；

（g）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1458位置对齐的位置处的色氨酸残基；

（h）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1500位置对齐的位置处的赖氨酸残基；

（i）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1533位置对齐的位置处的脯氨酸残基；以及

（j）在与SEQ ID NO：4中显示的氨基酸序列的1571位置对齐的位置处的缬氨酸残基。

5.权利要求1或2的方法，其中所述突变体AROM多肽缺失结构域5的至少一部分。

6.权利要求1、2或5的方法，其中所述突变体AROM多肽缺少结构域5。

7.权利要求1、2、5或6的方法，其中所述突变体AROM多肽是融合多肽，其包含：

（i）缺失结构域5的至少一部分；并且

（ii）具有3-脱氢莽草酸脱水酶（3DSD）活性。

8.权利要求1的方法，其中所述突变体COMT多肽能够催化原儿茶酸的–OH基团的甲基化，其中所述甲基化导致产生与异香草酸相比至少4倍多的香草酸。

9.权利要求1或8的方法，其中所述突变体COMT多肽具有在SEQ ID NO：27的整个长度上确定的与SEQ ID NO：27享有至少80%序列同一性的氨基酸序列；并且其具有的氨基酸序列与SEQ ID NO：27的差别为至少一个氨基酸残基。