[发明专利]神经源性因子和胶质生成性因子及其测定

权利要求书

1.一种用于测试促进神经发生或胶质生成的物质的方法，所述方法包括：

(a)在固体基底上培养间充质细胞；

(b)从基底除去所述间充质细胞，以便由所述间充质细胞产生的细胞外基质保留在所述基底上；

(c)在步骤(b)的基底上培养胚胎皮层细胞；

(d)将物质添加至步骤(c)的培养物中；和

(e)测量神经元或神经胶质细胞的生长；

其中神经元的生长表明所述物质促进神经发生，神经胶质细胞的生长表明所述物质促进胶质生成。

2.用于测试促进神经前体细胞(NPC)的生长或分化的物质的方法，所述方法包括：

(a)在固体基底上培养间充质细胞；

(b)从基底除去所述间充质细胞，以便由所述间充质细胞产生的细胞外基质保留在所述基底上；

(c)在步骤(b)的基底上培养胚胎皮层细胞；

(d)将物质添加至步骤(c)的培养物中；和

(e)测量NPC的生长或分化；

其中NPC的生长表明所述物质促进NPC的生长，NPC的分化表明所述物质促进NPC的分化。

3.权利要求1或2的方法，其中所述间充质细胞选自：

(a)间充质干细胞，和

(b)已用编码Notch细胞内结构域的核酸转染的间充质干细胞的后代。

4.权利要求1至3的任一项的方法，其中所述间充质细胞获自人。

5.权利要求1至4的任一项的方法，其中所述固体基底选自塑料、硝酸纤维素和玻璃。

6.权利要求的1至5任一项的方法，其中所述胚胎皮层细胞获自小鼠或大鼠。

7.权利要求1至6的任一项的方法，其中所述物质是化合物或多肽。

8.权利要求1至6的任一项的方法，其中所述物质是细胞、细胞培养物或来自细胞培养物的条件化培养基。

9.权利要求8的方法，其中所述细胞选自：

(a)间充质干细胞，和

(b)已用编码Notch细胞内结构域的核酸转染的间充质干细胞的后代。

10.权利要求8或9的任一项的方法，其中在细胞表面表达的蛋白质促进神经发生、胶质生成或NPC的生长或分化。

11.权利要求1或3至9的任一项的方法，其中神经元的生长通过轴突生长物或通过选自微管相关蛋白2(MAP2)、双皮质素(DCX)、β-微管蛋白III型(TuJ1)、突触囊泡蛋白和神经元特异性烯醇化酶的标志物的表达来测量。

12.权利要求1或3至9的任一项的方法，其中所述神经胶质细胞是星形胶质细胞，并且星形胶质细胞的生长通过神经胶质原纤维酸性蛋白质(GFAP)、Glast或谷氨酰胺合成酶的表达来测量。

13.权利要求1或3至9的任一项的方法，其中所述神经胶质细胞是少突胶质细胞，并且少突胶质细胞的生长通过选自2',3'-环核苷酸3'磷酸二酯酶(CNPase)、O1抗原、O4抗原、髓磷脂碱性蛋白、少突胶质细胞转录因子1、少突胶质细胞转录因子2、少突胶质细胞转录因子3、NG2和髓磷脂相关糖蛋白的标志物的表达来测量。

14.权利要求1或3至13的任一项的方法，其中将神经元或神经胶质细胞的生长分别与不存在所述物质的情况下神经元或神经胶质细胞的生长相比较。

15.权利要求2至10的任一项的方法，其中NPC的生长通过巢蛋白、Glast或SOX2的表达来测量。

16.权利要求2至10的任一项的方法，其中NPC的分化通过轴突生长物，或通过选自微管相关蛋白2(MAP2)、双皮质素(DCX)、β-微管蛋白III型(TuJ1)、突触囊泡蛋白、神经元特异性烯醇化酶、神经胶质原纤维酸性蛋白质(GFAP)、谷氨酰胺合成酶、GLAST谷氨酸转运蛋白、2',3'-环核苷酸3'磷酸二酯酶(CNPase)、O1抗原、O4抗原、髓磷脂碱性蛋白、少突胶质细胞转录因子1、少突胶质细胞转录因子2、少突胶质细胞转录因子3、NG2和髓磷脂相关糖蛋白的标志物的表达来证明。

17.权利要求2至10,15或16的任一项的方法，其中将NPC的生长或分化分别与不存在所述物质的情况下NPC的生长或分化相比较。