[发明专利]稳定的蛋白质

权利要求书

1.一种融合蛋白，其从N端至C端包含：

a）家族B的G蛋白偶联受体（GPCR）的第一部分，其包含GPCR的跨膜螺旋(TM)-1、TM2和TM3；

b）稳定的蛋白结构域；以及

c）GPCR的第二部分，其包含GPCR的TM4、TM5、TM6和TM7。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述GPCR是家族B的GPCR，例如类胰高血糖素肽1受体(GLP1R)、类胰高血糖素肽2受体(GLP2R)、降钙素受体(CT)、糊精/CGRP受体(AMY₁α)、糊精受体(AMY₂α)、糊精/CGRP受体(AMY₃α)、CGRP/肾上腺髓质素受体(CGRP₁α)、肾上腺髓质素/CGRP受体(AM₁α)、肾上腺髓质素/CGRP受体(AM₂α受体)、促肾上腺皮质素释放因子受体(CRF₁)、尿皮质素受体(CRF₂)、生长激素释放激素受体(GHRH)、抑胃多肽受体(GIP)、胰高血糖素受体、分泌素受体、TIP-39受体(PTH2)、甲状旁腺激素受体(PTH1)、VIP/PACAP受体(VPAC₁)、PACAP受体(PAC₂)以及VIP/PACAP受体(VPAC₂)中的任一。

3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述GPCR是相对其亲代GPCR具有增加的构象稳定性的突变体GPCR。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述稳定的蛋白结构域插入至GPCR的细胞内环2（ICL2）区，其中所述环连接GPCR的第一和第二部分。

5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其中根据图6所示人GLP1R的编号，在与氨基酸Phe257和Ser261相对应的氨基酸残基之间的位置上，将稳定的蛋白结构域插入至所述GPCR的ICL2区。

6.根据权利要求5所述的融合蛋白，其中根据图6所示人GLP1R的编号，在与氨基酸Phe257相对应的氨基酸之后并在与氨基酸Ser261或Phe260或Val259相对应的氨基酸之前，将稳定的蛋白结构域插入至所述GPCR的ICL2区。

7.根据权利要求5所述的融合蛋白，其中根据图6所示人GLP1R的编号，在与氨基酸Ser258相对应的氨基酸之后并在与氨基酸Ser261或Phe260或Val259相对应的氨基酸之前，将稳定的蛋白结构域插入至所述GPCR的ICL2区。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的融合蛋白，其中稳定的蛋白结构域包含溶菌酶，如T4溶菌酶的氨基酸序列。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白，其进一步包含可检测的部分，例如荧光标记、放射性标记或者酶标记中的任一。

10.根据权利要求9所述的融合蛋白，其中所述可检测的部分是EGFP。

11.一种编码如权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白的多核苷酸。

12.一种包含如权利要求11所述的多核苷酸的宿主细胞。

13.一种包含如权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白的晶体。

14.根据权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白，其处于溶解的形式或者其基本不含其它蛋白或者其固定至固相载体。

15.如权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白在用于结晶、或用于药物发现如在配体结合筛选或在分析开发中、或作为生物传感器中的用途。

16.一种使如权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白结晶方法，所述方法包括提供如权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白并使之结晶以获得晶体。

17.根据权利要求16所述的方法，其中通过培养如权利要求12所述的宿主细胞以表达所述融合蛋白并分离所述蛋白来提供所述融合蛋白。

18.根据权利要求16或17所述的方法，其中使用脂立方相结晶学进行结晶。