[发明专利]肌肉肌醇和肌肉肌醇衍生物的制造方法

权利要求书

1.一种肌肉肌醇或肌肉肌醇衍生物的制造方法，其包括下述工序：

1)准备转化体的工序，该转化体为不表达内源性肌醇-1-磷酸合成酶的微生物的转化体，其至少含有以能够在该转化体内表达的方式导入的编码肌醇-1-磷酸合成酶的外来基因，并且具有对该转化体内的功能性肌醇单磷酸酶的过剩生产或肌醇单磷酸酶的活化进行诱导的基因重组或变异；以及

2)在适于所述转化体的生长和/或维持的条件下，使该转化体与能够由该转化体转换为肌肉肌醇的碳源进行接触的工序。

2.如权利要求1所述的制造方法，其中，所述肌肉肌醇衍生物为下述结构式所表示的化合物：

[化1]

3.如权利要求1或2所述的制造方法，其中，所述不表达内源性肌醇-1-磷酸合成酶的微生物为原核生物。

4.如权利要求1至3的任一项所述的制造方法，其中，所述不表达内源性肌醇-1-磷酸合成酶的微生物为具有内源性肌醇单磷酸酶基因的微生物。

5.如权利要求1至4的任一项所述的制造方法，其中，所述不表达内源性肌醇-1-磷酸合成酶的微生物为选自由大肠杆菌、芽胞杆菌属细菌、棒状杆菌属细菌、发酵单胞菌属细菌组成的组中的细菌。

6.如权利要求5所述的制造方法，其中，所述细菌为大肠杆菌。

7.如权利要求1至6的任一项所述的制造方法，其中，所述肌醇单磷酸酶的过剩生产是通过对所述微生物进行以下操作而诱导的：

a)导入外来肌醇单磷酸酶基因；

b)增加内源性肌醇单磷酸酶基因的拷贝数；

c)在内源性肌醇单磷酸酶基因的调节区域导入变异；

d)利用高表达诱导性外来调节区域来置换内源性肌醇单磷酸酶基因的调节区域；或者

e)使内源性肌醇单磷酸酶基因的调节区域缺失。

8.如权利要求7所述的制造方法，其中，所述肌醇单磷酸酶的过剩生产是通过对所述微生物导入外来肌醇单磷酸酶基因而诱导的。

9.如权利要求1至6的任一项所述的制造方法，其中，所述肌醇单磷酸酶的活化是通过对所述微生物进行以下操作而诱导的：

f)在内源性肌醇单磷酸酶基因中导入变异；

g)置换内源性肌醇单磷酸酶基因的一部分或全部；

h)使内源性肌醇单磷酸酶基因的一部分缺失；

i)使降低肌醇单磷酸酶活性的其它蛋白质减少；

j)使降低肌醇单磷酸酶活性的化合物的生成减少。

10.如权利要求1至9的任一项所述的制造方法，其中，所述碳源包含可在所述转化体内转换为葡萄糖-6-磷酸的化合物。

11.如权利要求10所述的制造方法，其中，所述碳源为选自由D-葡萄糖、蔗糖、寡糖、多糖、淀粉、纤维素、米糠、废糖蜜以及含有D-葡萄糖的生物物质组成的组中的1种以上。

12.如权利要求1至11的任一项所述的制造方法，其中，该方法进一步包括以下工序：

分离肌肉肌醇或肌肉肌醇衍生物的工序，该肌肉肌醇或肌肉肌醇衍生物是在与所述碳源的接触下进行生长和/或维持的所述转化体的培养物中累积得到的。

13.一种转化体，其为不表达内源性肌醇-1-磷酸合成酶的微生物的转化体，该转化体至少含有以能够在该转化体内表达的方式导入的编码肌醇-1-磷酸合成酶的外来基因，并且具有对该转化体内的功能性肌醇单磷酸酶的过剩生产或肌醇单磷酸酶的活化进行诱导的基因重组或变异。

14.如权利要求13所述的转化体，其中，所述不表达内源性肌醇-1-磷酸合成酶的微生物为原核生物。

15.如权利要求13或14所述的转化体，其中，所述不表达内源性肌醇-1-磷酸合成酶的微生物为具有内源性肌醇单磷酸酶基因的微生物。

16.如权利要求13至15的任一项所述的转化体，其中，所述不表达内源性肌醇-1-磷酸合成酶的微生物为选自由大肠杆菌、芽胞杆菌属细菌、棒状杆菌属细菌、发酵单胞菌属细菌组成的组中的细菌。

17.如权利要求16所述的转化体，其中，所述细菌为大肠杆菌。