[发明专利]编码传染性喉气管炎病毒和新城疫病毒抗原的重组非致病性马立克氏病病毒构建体

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2011年10月21日提交的美国临时申请序号No. 61/549,844在35 U.S.C. § 119(e)下的优先权，其内容通过引用以其整体并入本文。

发明领域

本申请涉及编码并表达传染性喉气管炎病毒和新城疫病毒蛋白抗原的新型重组多价非致病性马立克氏病病毒构建体，及其在家禽疫苗中使用的方法。

发明背景

致病性家禽病毒不仅使鸡变得虚弱，而且还使鸡养殖者损失惨重，因为大多数的所致疾病是传染性的，并且家禽工业严重依赖于封闭的大规模饲养设备。接种幼鸡通常是对抗这些病毒的唯一可行方式。尽管减毒或灭活的家禽病毒疫苗仍是市场中的重点，近年来，已花费大量资源用于开发包含表达致病性病毒蛋白抗原的重组病毒构建体的疫苗。此外，已进行大量努力以构建稳定且有效的表达来自多种病毒病原体的外源基因的多价重组非致病性马立克氏病病毒(rMDV_np)载体。这样的多价疫苗将用于使给予小鸡的注射次数最小化，并且由此减少对接种小鸡的不适和胁迫，并且显著降低人工和材料的费用。使用这样的单个多价构建体接种还将优于包含多个重组单价rMDV_np构建体的可选的多价rMDV_np疫苗，因为至少迄今为止，这些可选疫苗产生仅针对单一病毒病原体的保护作用。这些可选疫苗的失利可能是由于单价rMDV_np构建体之一生长超过其他单价rMDV_np构建体，从而抑制这些其他单价rMDV_np构建体诱导显著的免疫反应。在任何情况下，尽管迄今为止的过去曾大量努力以构建稳定且有效的表达来自多种病毒病原体的外源基因的多价重组rMDV_np载体，但已证实这些努力没有成功。

可通过疫苗接种控制的一种家禽病毒疾病是马立克氏病(Marek's disease)。马立克氏病是在全世界不利地影响鸡的致病性疾病。马立克氏病主要发生在2至5月龄之间的幼鸡中。临床症状包括：一个或多个肢的进行性麻痹，由于腿的麻痹导致的动作失调，由于累及翅膀而导致的翼下垂，以及由于累及颈部肌肉而导致的头位置降低。在急性情况下，可产生严重的机能降低。还可发生法氏囊和胸腺萎缩。

马立克氏病的病原体是马立克氏病病毒血清型1 (MDV1)，一种具有双链DNA基因组的细胞相关病毒。MDV1是嗜淋巴细胞的鸟类α疱疹病毒，其：(i) 感染B细胞，这可导致细胞溶解，和(ii) 潜伏地感染T细胞，这可诱导T细胞淋巴瘤。与毒性MDV1株密切相关的马立克氏病病毒血清型2 (MDV2)，此前称作原鸡属疱疹病毒3，是天然的减毒MDV株，其已显示具有极低或没有在鸡中的致病性[Petherbridge等人，J.　Virological　Methods 158:11-17 (2009)]。SB-1是特异的MDV2株，其已显示可用于针对MDV1的疫苗中[参见例如，Murthy和Calnek，Infection and Immunity 26(2) 547-553 (1979)]。

另一个密切相关的α疱疹病毒，马立克氏病病毒血清型3 (MDV3)，更广泛地称作火鸡疱疹病毒(HVT)，是驯养火鸡的非致病性病毒[参见例如，Kingham等人，J.　of　General　Virology 82:1123-1135 (2001)]。两种通常使用的HVT株是PB1株和FC126株。同时，HVT在鸡中也是非致病性的，它确实在鸡中诱导针对MDV1的长期持续的保护性免疫反应。因此，HVT已多年用于针对毒性MDV1的家禽疫苗，通常与SB-1组合，SB-1比HVT病毒性更高，但认为其安全性较低。或者，当禽群受到特别毒性的MDV1株的攻击(challenge)时，HVT可以与Rispens疫苗(Rispen's vaccine)组合。Rispens疫苗是源自温和毒性MDV1株，随后通过细胞继代进一步弱化的分离物。然而，Rispens株保留了对高易感性鸡品系的某些毒力。