[发明专利]癌症治疗用疫苗制剂

说明书

技术领域

本发明涉及癌症的治疗法，特别涉及癌症治疗用疫苗。更详细而言，涉及包含作为疫苗抗原的合成长肽与作为抗原传递系统的疏水化多糖类以及刺激抗原提呈细胞的免疫增强剂的癌症治疗用疫苗制剂。

背景技术

关于对癌症的免疫应答的多年研究的结果明确了细胞性免疫在癌症宿主的肿瘤排斥中的重要性。特别是明确了CD8阳性细胞毒性T细胞(以下为杀伤性T细胞)是具有直接破坏肿瘤作用的效应细胞，CD4阳性辅助性T细胞(以下为辅助性T细胞)是增强杀伤性T细胞和抗原提呈细胞功能的重要的调节细胞，并且，以树突细胞为中心的抗原提呈细胞在向T细胞提呈抗原进行刺激的同时，通过各种辅刺激分子和细胞因子等将T细胞活化，如以下所述，确立了担负对肿瘤的细胞性免疫应答的各细胞的作用和位置(非专利文献1)。

来自肿瘤细胞的蛋白质或作为疫苗抗原所投与的蛋白质被树突细胞等抗原提呈细胞摄入后，被细胞内的蛋白酶组切断为各种长度的肽。生成的肽中，8～10个氨基酸的肽能够作为抗原表位肽被搭载于主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex，MHC)Ⅰ类分子，在细胞表面被提呈。杀伤性T细胞利用T细胞受体(T cell receptor，TCR)特异性识别该MHCⅠ类/抗原肽复合体而活化。活化的杀伤性T细胞识别在肿瘤细胞上也存在的MHCⅠ类/抗原肽复合体，使用颗粒蛋白酶和穿孔蛋白等效应分子破坏肿瘤细胞。

为了使杀伤性T细胞充分地活化，辅助性T细胞的作用非常重要(非专利文献2)。被树突细胞等抗原提呈细胞摄入的抗原蛋白质被细胞内的蛋白酶组切断为各种长度，其中，15～20个氨基酸的抗原肽与MHCⅡ类分子形成复合体，在抗原提呈细胞上被提呈。辅助性T细胞特异性识别该复合体而活化。活化的辅助性T细胞通过分泌干扰素(interferon，IFN)-γ和白细胞介素(interleukin，IL)-2等细胞因子，增强杀伤性T细胞的增殖和生存、功能。另外，辅助性T细胞通过CD40配体/CD40通路也具活化树突细胞的作用，被辅助性T细胞活化的树突细胞提高对杀伤性T细胞的刺激能力(非专利文献3)。目前众所周知，辅助性T细胞也具有增强B细胞的抗原特异性IgG抗体产生的作用。

这样，杀伤性T细胞通过树突细胞等抗原提呈细胞而被抗原特异性活化，辅助性T细胞作为进一步增强杀伤性T细胞和树突细胞双方作用的重要增强者而发挥作用。这3种免疫细胞在对肿瘤的细胞性免疫有效运作上缺一不可地存在。发明人报告了只刺激杀伤性T细胞而不活化辅助性T细胞的肽只诱导低劣的杀伤性T细胞，不显示治疗效果(非专利文献4)，在开发癌症治疗用疫苗中，怎样将这3种免疫细胞活化而使其有效地发挥功能成为重要的课题。

发明人曾经以杀伤性T细胞和辅助性T细胞的同时活化为目标，制作将肿瘤抗原蛋白质的重组全长蛋白质作为抗原的多价性癌症治疗用疫苗。在全长蛋白质中，包含杀伤性T细胞和辅助性T细胞分别识别的多种抗原肽，期待将两种T细胞同时活化。但是，外源性(细胞外)的抗原蛋白质通过MHCⅡ类途径活化辅助性T细胞容易进行，但通过MHCⅠ类路径活化杀伤性T细胞则难以进行。这是由抗原提呈细胞中的外源性抗原蛋白质的摄入和处理结构上的原因所产生的(非专利文献5)。

因此，在国内外，化学合成短链的肽，以杀伤性T细胞识别的8～10个残基的表位肽为主，作为疫苗在临床应用中进行大量的尝试。由于短链肽不经过抗原提呈细胞内的摄入和处理而与细胞表面的MHC分子直接结合，所以容易引起向T细胞的提呈。另外，重组全长蛋白质使用大肠杆菌和哺乳类细胞等生产并需要精制，在制造体系的构筑和品质管理中需要很多时间和劳力。与此相对，短链肽能够通过化学合成制造，与重组蛋白质的制造相比，具有简便的优点。

但是，包含短链肽的癌症治疗用疫苗被指出若干重要的课题。由于短链肽疫苗的大多数只包含杀伤性T细胞的识别表位肽，所以是不伴有辅助性T细胞活化的单价性疫苗，所诱导的细胞性免疫的质量和治疗效果不充分(非专利文献4)。如果将杀伤性T细胞和辅助性T细胞的识别肽分别作为短链肽合成，以它们的混合物组成疫苗，就有能够得到将杀伤性T细胞和辅助性T细胞同时活化而产生优良品质的杀伤性T细胞诱导和治疗效果的可能性。但是，此时由于杀伤性T细胞和辅助性T细胞的识别表位肽作为各自的成分被投与，所以，各自的树突细胞分别提呈各自的肽，不能实现杀伤性T细胞和辅助性T细胞的相互作用的可能性高(非专利文献3)。