[发明专利]造血祖细胞群体和富集其干细胞的方法

权利要求书

1.一种富集造血祖细胞的干细胞群体的方法，所述方法包括：

a.在人胚胎干细胞或人诱导型多潜能干细胞的群体中诱导造血性分化；

b.基于CD43的表达以及CD34、CD31和CD144中至少一者的表达分选群体；并且

c.选择为CD34⁺CD43^-、CD31⁺CD43^-和CD144⁺CD43^-中至少一者的级分。

2.根据权利要求1所述的方法，其中诱导造血性分化在无血清情况下实施。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中诱导造血性分化在无间质情况下实施。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中诱导造血性分化包括在第0日和第4日之间将群体与BMP4一起培养。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中诱导造血性分化包括在第1日和第8日之间将群体与bFGF一起培养。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中诱导造血性分化包括在第3日和第13日之间或在第4日和第9日之间将群体与VEGF、DKK、IL-6和IL-11和/或它们的组合中至少一者一起培养。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中诱导造血性分化包括在第4日和第13日之间或在第6日和第9日之间将群体与SCF和EPO至少一者一起培养。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中诱导造血性分化包括在第6日和第13日之间或在第8日和第9日之间将群体与TPO、Flt-3和IL-3和/或它们的组合中至少一者一起培养。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中诱导造血性分化包括将群体与高达1ng/ml、优选地约0.3ng/mL和进一步优选地约0ng/mL活化素A一起培养。

10.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中诱导造血性分化包括抑制活化素/nodal信号传导。

11.根据权利要求10所述的方法，其中抑制活化素/nodal信号传导包括将群体与活化素/nodal抑制剂一起培养。

12.根据权利要求11所述的方法，其中抑制剂是SB-431542。

13.根据权利要求11-12中任一项所述的方法，其中将抑制剂在分化的第1.5日和第5日之间或在分化的第2日和第4日之间或分化的约第1.75日添加至细胞的培养物。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中分选在分化的约第6日和约第13日之间或在分化的约第7日和约第10日之间进行。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中基于CD43和CD34的表达分选群体并且选择的级分是CD34⁺CD43^-。

16.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中基于CD43和CD31的表达分选群体并且选择的级分是CD31⁺CD43^-。

17.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中基于CD43和CD144的表达分选群体并且选择的级分是CD144⁺CD43^-。

18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述级分包含至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％造血祖细胞。

19.造血祖细胞群体，其使用根据权利要求1-18中任一项所述的方法获得。

20.一种富集造血祖细胞的干细胞群体的方法，包括在造血性分化期间抑制活化素/nodal信号传导。

21.根据权利要求20所述的方法，其中抑制活化素/nodal信号传导包括将所述群体与活化素/nodal抑制剂、优选地SB-431542一起培养。