[发明专利]纤维蛋白原测定

权利要求书

1.一种检测完整纤维蛋白原的方法，包括以下步骤：

a) 提供样品，所述样品包含任选地至少部分地转化为纤维蛋白的至少一些纤维蛋白原，并且任选地包含凝血酶；

b) 将所述样品溶解在抑制凝血酶活性的溶解溶液中；

c) 将所述样品的一部分转移到凝胶，并使所述部分经受电泳；

d) 将样品的所述部分的级分从所述凝胶转印到蛋白质结合膜，并将所述纤维蛋白原固定在所述膜上；

e) 使所述膜经受至少一个封闭步骤；

f) 使固定在所述膜上的所述纤维蛋白原与能够结合纤维蛋白肽A部分的单克隆一抗反应，以形成纤维蛋白原-抗体复合物；

g) 使所述膜经受至少一个洗涤步骤，以去除任何未结合的单克隆一抗；

h) 使形成所述纤维蛋白原-抗体复合物的所述单克隆抗体与具有标记物的二抗反应；

i) 使所述膜经受至少一个洗涤步骤，以去除任何未结合的具有标记物的二抗；以及

j) 通过对所述标记物的量进行定量，检测所述样品中完整纤维蛋白原的量。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品包含未知量的完整纤维蛋白原。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品为固体、液体或半液体。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品包含冻干的纤维蛋白原和凝血酶。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法采用SDS-PAGE和蛋白质印迹。

6.根据权利要求1所述的方法，其中能够结合纤维蛋白肽A部分的所述单克隆一抗为克隆1F7。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述单克隆一抗能够结合所述纤维蛋白原上的纤维蛋白肽B部分。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述具有标记物的二抗为缀合至碱性磷酸酶的山羊抗小鼠IgG。

9.根据权利要求1所述的方法，其中通过对所述标记物的量进行定量来检测所述样品中完整纤维蛋白原的量的所述步骤通过将所述蛋白质结合膜与碱性磷酸酶的底物进行温育而进行。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述标记物为电化学检测标记物、比色测定法检测标记物、放射学检测标记物、磁学检测标记物或荧光标记物。

11.一种用于评估止血装置的性能或稳定性的方法，所述止血装置包含至少一种为纤维蛋白原的生物组分，所述方法包括将根据权利要求1所述的方法获得的样品中完整纤维蛋白原的量相对于完整纤维蛋白原的阈值水平进行比较。

12.一种检测完整纤维蛋白原的方法，包括以下步骤：

a) 提供样品，所述样品包含任选地至少部分地转化为纤维蛋白的至少一些纤维蛋白原，并且任选地包含凝血酶；

b) 将所述样品溶解在抑制凝血酶活性的溶解溶液中；

c) 将所述样品的一部分施加到蛋白质结合膜，并将所述纤维蛋白原固定在所述膜上；

d) 使所述膜经受至少一个封闭步骤，并从所述膜去除从纤维蛋白原裂解的纤维蛋白肽A；

e) 使固定在所述膜上的所述纤维蛋白原与能够结合纤维蛋白肽A部分的单克隆一抗反应，以形成纤维蛋白原-抗体复合物；

f) 使所述膜经受至少一个洗涤步骤，以去除任何未结合的单克隆一抗；

g) 使形成所述纤维蛋白原-抗体复合物的所述单克隆抗体与具有标记物的二抗反应；

h) 使所述膜经受至少一个洗涤步骤，以去除任何未结合的具有标记物的二抗；以及

i) 通过对所述标记物的量进行定量，检测所述样品中完整纤维蛋白原的量。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述样品包含未知量的完整纤维蛋白原。

14.根据权利要求12所述的方法，其中所述样品为固体、液体或半液体。

15.根据权利要求12所述的方法，其中所述样品包含冻干的纤维蛋白原和凝血酶。

16.根据权利要求12所述的方法，其中能够结合纤维蛋白肽A部分的所述单克隆一抗为克隆1F7。

17.根据权利要求12所述的方法，其中所述单克隆一抗能够结合所述纤维蛋白原上的纤维蛋白肽B部分。