[发明专利]作为冰冻切片的替代物的超快诊断组织制剂

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2011年9月29日提交的申请号为61/540947的美国专利申请的权益。

技术领域

本发明涉及用于诊断组织制剂的化学方法和机械装置。在手术过程中从病人身体切下的实体组织的新鲜(即不是固定的或冰冻的)样本可以作为冰冻切片的组织学检测的替代品来制备(即切割后再加工)，并且不会遭遇后者的伪迹(artifact)。这些方法和这些系统使得能够通过石蜡切片的组织学检测来进行术中诊断，这避免了检测冰冻切片时会遭遇的伪迹。

背景技术

用于组织处理的方法和系统已被描述(见WO99/09390、WO01/44783、WO01/44784和WO2005/40763)。它们需要一种至少为酮和醇的混合物，用于化学处理。在此，证明了并不需要醇。可从手术中的病人来获得组织样本。可将其样品加工成组织块，该组织块被切片，组织切片由解剖病理学家检测。所述组织切片的组织学检测和诊断在病人离开手术之前完成。本发明相对于冰冻切片的优势是在显微镜下观测到的组织切片的形态保持在组织块中。无论所述块是通过常规处理法或本发明来制备，来自组织块的切片的质量都显得是相同的。主要由在冰冻切片的组织学检测过程中观察到的伪迹造成的不一致或延迟的诊断将通过本发明的应用而避免。

手术中病理学会诊涉及在手术中从病人获取的样本的巨检和镜检。最常见地，在显微镜下的组织切片的组织学检测通过染料染色来实现，以检测组织形态。常规地，这是在来自实体组织的“冰冻”切片上实现，以至于解剖病理学家在病人离开手术之前(即手术中)诊断是可能的。见Keeney&Leslie，JAMA300:1074-1075(2008)。Wilson研发的冰冻切片技术的历史在其发表一百周年由Gal&Cagle,JAMA294:3135-3137(2005)和Lechago,Arch.Pathol.Lab.Med.129:1529-1530(2005)详细叙述。

由美国病理学家学会(College of American Pathologists，CAP)认证的实验室认证要求使用冰冻切片的手术中诊断通过从相同组织获得的所谓“永久”切片的后续研究来确认，所述“永久”切片包埋在石蜡块中，先前用来获得冰冻切片。从CAP Q专题项目中的参与者的报告来看，在冰冻切片和永久切片之间存在至少约1％-2％的不一致(即手术中诊断中的足够的冰冻切片研究，其与石蜡切片存在诊断不一致)。见Raab et al.,Arch.Pathol.Lab.Med.130:337-342(2006)。因为该原因以及由延迟诊断导致的延迟，将需要提供通过本发明制备的来自组织块的切片的手术中诊断。但是，缩短制备源自手术样本、用于组织学检测的组织样品所需的时间以使得能实现手术中诊断对于现有方法和系统已作出的大量修改。

现在描述对于组织制备的方法和系统的这些改进。其特征在于：(i)将实体组织切割成约0.6mm的均一的厚度，和/或(ii)至少为酮和油的化学混合物，以使组织样品变硬，和/或(iii)冷却剂，以固化包含组织样本的块。优选地，在切割期间，组织样品先与化学混合物接触，以启动组织硬化，由此便于将它切成一个或多个组织样品。无组织学伪迹是相对于冰冻切片的常规组织学检测的改进，在现有技术中已知其可预期产生不一致和延迟的诊断。对永久切片的后续研究的要求变得毫无意义了，因为通过本发明获得了一致的形态。

本发明的其他优点在下面讨论或者通过该讨论将对本领域技术人员来说是显而易见的。

发明内容

本发明的一个目的是提供快速诊断组织制剂。在手术中从病人的身体切下的实体组织的样本作为组织标本来处理而无需提前冰冻。来自处理过的标本的块的组织切片具有与用常规处理法制备的石蜡块相似或相同质量的形态学特征。这相对于冰冻切片的组织学检测是一种改善，不会遭遇后者的形态伪迹，排除重新处理组织的需要并避免延迟。

本方法和系统与组织标本的加工是兼容的，以产生块，将所述块进行切片，来用于组织学、原位抗体结合、核酸杂交、其他蛋白质或遗传分析(例如片段的指纹鉴定或确定其序列)、形态和核酸的存档，以及其组合。