[发明专利]miRNA在胎盘组织中的表达

说明书

技术领域

本发明总体上涉及可用于免疫调节的结合分子，特别是与调节免疫系统相关或可用于调节免疫系统的人类miRNA以及其前体、衍生物、变体和模拟物。另外，本发明涉及包含所述结合分子、其前体和模拟物的药物和诊断组合物，所述组合物不仅在作为诊断工具用于鉴别与妊娠期间母体免疫系统的调节有关的转录单元的突变方面，而且在如妊娠相关疾病、胎盘形成障碍或问题、自身免疫疾病等与免疫系统误调节或过度活跃相关的病症的治疗策略中或在预防或治疗移植物对抗宿主的反应方面是有价值的。

背景技术

为了成功怀孕，必需调节母体的免疫系统。已知胎盘的胚胎/胎儿部分，且确切地说是它的滋养层，能够产生可以通过与母体免疫系统局部地(即，在蜕膜内以及在外围)发生相互作用来预防胚胎排斥反应的因子。然而，免疫调节必须在早期妊娠期间就已经有效地发挥作用。在妊娠的前三个月，不少于30％到40％的蜕膜由母体免疫细胞组成，其中大部分(约70％)是NK细胞，但已知巨噬细胞和T细胞也以相当大的百分比存在(Warning等,2011)。

尽管这些介导免疫调节的因子中有一些是已知的，但其它的仍然有待于鉴别。调节母体免疫系统的能力并不限于滋养层，胎儿基质细胞也能够与母体免疫系统的细胞进行有效的交谈(Roelen等,2009)。旨在鉴别负责母体免疫系统的调节的机制的实验似乎指示可溶性因子以及粒子在这个过程中起重要作用。其中后者是可以由多种细胞类型释放的外来体，即，小膜囊，且含有由蛋白质、脂质以及mRNA和miRNA组成的多样性货物蛋白(cargo)(Valadi等,2007)。在妊娠期间，滋养层的细胞可以分泌似乎会抑制母体免疫系统的外来体(Southcombe等,2011)。然而，不知道这种抑制实际上是如何实现的和其中究竟涉及哪些因子。这些因子的鉴别将为妊娠相关病症或妊娠期间的并发症领域内的治疗和诊断策略提供新的手段，并且可能也可用于治疗若干种与免疫系统失调或过度活跃相关的疾病。

已经通过权利要求书中所描绘的和下文所描述的实施方案解决了这一技术问题。

发明内容

本文中所提供的数据令人惊讶地突出了C19MC miRNA在早期妊娠和胎盘基质细胞中的早期功能。这个数据暗示C19MC以及miR-371-3簇的miRNA是重要的免疫调节剂。已经指定编码这两个簇的基因在染色体19的长臂上紧邻彼此(图1)。就本文中所提供的数据而言，本发明总体上涉及提供用于免疫调节的C19MC以及miR-371-3簇的miRNA、其前体。就此而言，也提供了共有共同种子序列AAGTGC的其它miRNA和能够干扰这些miRNA分子的靶基因的基因表达的结合分子。此外，本发明提供了包含如上文和下文所定义的miRNA分子的核酸序列的核酸、载体和宿主细胞，其中所述核酸序列可操作地连接到调节序列，例如启动子、增强子，所述调节序列用于诱导和控制本发明的上述miRNA分子、其前体或其它结合分子在宿主细胞和/或患者中的表达。就此而言，本发明还提供了可用于治疗或诊断总体上与免疫系统失调有关联的病症(如同在自身免疫疾病、妊娠相关疾病、胎盘形成或植入障碍或问题的情况下)和治疗或预防同种异体移植物(植入物)的排斥反应或由于移植物对抗宿主的反应所致的病症的药物组合物和诊断组合物。此外，本发明还提供了可用于处理被自身免疫疾病侵袭的细胞或者预防或处理例如自身免疫疾病情况下的自体组织破坏现象的药剂。本发明所提供的和上述组合物中所使用的药剂是被设计用于不同的施用形式，如局部或全身施用。

附图说明

图1：具有两个miRNA簇，即C19MC和miR-371-3的染色体区19q13的图解

图2：52个胎盘组织中的miRNA miR-520c-3p的相对表达相对于妊娠周数的关系图。

图3：绒膜绒毛的显微解剖图。首先从绒膜绒毛(A)切除基质核心(B)，然后切除滋养层(C)。

图4：以下miRNA在基质和滋养层细胞中的相对表达：miR-371-3p、miR-372、miR-373和miR-520c-3p。

图5：miR-520c-3p和miR-517a-3p在蜕膜和滋养层细胞中的相对表达。

图6：说明靶向基因转录物的miRNA充当Fas-FasL诱导的细胞凋亡的抑制剂的的图解。已经根据miRBase(18发行版)鉴别了标靶。

图7：分别在96小时和120小时利用BrdU测定在与JEG-3细胞和bAMC共培养的PBMC中所测量的细胞增殖。