[发明专利]具有受限制的免疫球蛋白重链的小鼠

权利要求书

1.一种生产小鼠的方法，包括基因修饰小鼠基因组以在其种系中包含受限制的内源性免疫球蛋白重链基因座，所述受限制的内源性免疫球蛋白重链基因座特征在于，存在单一未经重排的人源V_H基因区段、多个未经重排的人源D_H基因区段和多个未经重排的人源J_H基因区段，其中在小鼠的所述内源性免疫球蛋白重链基因座处所述单一未经重排的人源V_H基因区段及所述未经重排的人源D_H和J_H基因区段能够重组以形成可操作地与至少包含小鼠IgM基因的小鼠免疫球蛋白重链恒定区连接的经重排的人源免疫球蛋白重链可变结构域，其中所述单一未经重排的人源V_H基因区段是单一未经重排的人源V_H1-69基因区段或其多态性变体；

所述小鼠进一步包含B细胞，所述B 细胞包含来源于所述受限制的免疫球蛋白重链基因座的经重排的人源免疫球蛋白重链可变结构域基因序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述小鼠包含全部功能性的内源性V_H、D_H和J_H基因区段的缺失。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述小鼠进一步包含与多个人源J_H基因片段可操作地连接的多个人源免疫球蛋白V_L基因区段。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述多个人源V_L基因区段和/或所述多个人源J_L基因区段选自人κ和人λ基因区段。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述多个人源免疫球蛋白V_L基因区段和多个人源J_L基因区段可操作地与非人源轻链恒定基因连接。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述非人源轻链恒定基因选自小鼠κ或λ恒定区基因。

7.根据权利要求2的生产小鼠的方法，其中对所述小鼠基因组的修饰包括在内源性免疫球蛋白重链基因座处用所述单一未经重排的人源V_H1-69基因区段或其多态性变体、多个未经重排的人源D_H基因区段和多个未经重排的人源J_H基因区段取代全部功能性的内源性V_H、D_H和J_H 基因区段，从而使得所述单一未经重排的人源V_H1-69基因区段或其多态性变体、多个未经重排的人源D_H基因区段和多个未经重排的人源J_H基因区段可操作地与所述包含至少一个小鼠IgM基因的小鼠免疫球蛋白重链恒定区连接。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述小鼠进一步包括在内源性免疫球蛋白轻链基因座用多个人源V_L和多个人源J_L基因区段取代 全部功能性的内源性V_L和J_L基因区段 。

9.一种来源于根据权利要求1-8任一项所述的方法生产的小鼠的细胞或组织，其中所述细胞不是ES细胞、多能细胞、诱导多能细胞、全能细胞或生殖细胞。

10.根据权利要求9所述的细胞或组织，其中所述细胞是B细胞。

11.根据权利要求9所述细胞或组织，其中所述组织选自结缔、肌肉、神经、上皮组织、脾脏、淋巴结或骨髓。

12.一种来源于根据权利要求1-8任一项所述方法生产的小鼠的细胞核。

13.一种制备编码人源免疫球蛋白V_H结构域的核酸序列的方法，所述方法包括：

（a）使用抗原免疫根据权利要求1-8任一项所述的方法生产的小鼠；

（b）使得所述小鼠产生针对所述抗原的免疫应答；以及，

（c）从所述小鼠中获得编码人源免疫球蛋白V_H结构域的核酸序列。