[发明专利]用于蛋白质的混合式色谱纯化的固相

说明书

通过一种混合式色谱系统纯化蛋白质，该系统由将具有阳离子交换和疏水官能团的配体与大孔支持物基质连接而形成，配体与支持物基质之间仅通过疏水基团和支持物基质之间链连接，所述链具有不超过3个原子的主链。

相关申请的交叉引用

本申请要求2011年10月19日提交的美国临时专利申请号61/549,146的优先权，通过引用将该申请的内容全文纳入本文。

发明背景

1.技术领域

提供了用于纯化或分离目的的从液体源提取免疫球蛋白或其他蛋白质的技术，特别的重点在于色谱分离技术和材料。

2.现有技术说明

从主要是哺乳动物体液或细胞培养收获物的液体源提取免疫球蛋白和其他蛋白质通常对于得到充分浓缩或纯化形式的用于诊断和治疗用途以及实验室研究的蛋白质而言是重要的。然而，蛋白质(尤其是免疫球蛋白)的纯化通常受到以下因素的影响：低产率、使用昂贵的分离介质、分离介质浸入产物中，和在提取过程中使用的外源性材料的安全控制的影响。本发明设法解决这些问题中的至少一些。

发明内容

已经发现可以通过使用混合式色谱系统来实现对免疫球蛋白和其他蛋白质的异常高效提取(即纯化)，该混合式色谱系统结合阳离子交换和疏水官能团以及大孔支持基质。将阳离子交换和疏水性官能团被纳入配体中，使该配体结合至固体基质，所述固体基质具有0.5微米或更大的中值直径的孔(基本上没有直径小于0.1微米的孔)，并且所述配体由该配体上的疏水基团通过1-3个原子的链的连接偶联至所述支持物基质。使用常规结合和洗脱条件，在低pH下实现蛋白质与基质支持的配体的结合，而在较高pH下实现对已结合蛋白质的洗脱。例如，利用液体源一次通过分离介质来获得高产率的高度纯化的免疫球蛋白。分离介质，即，基质支持的配体与使配体与基质连接的方法一样本身是创新的。

在一些实施方式中，提供了用于从源溶液纯化蛋白质的方法，所述方法如下：

(a)使源溶液接触混合式色谱介质，所述混合式色谱介质包含与固体支持物偶联的配体，该配体包含疏水基团以及羧基基团或磺基基团，其中疏水基团通过含肽连接与羧基基团或磺基基团接合，并且其中固体支持物具有中值直径为0.5微米或更大的孔并且基本没有直径为0.1微米或更小的孔，并且其中配体由疏水基团通过1-3个原子的链偶联至固体支持物，以通过配体来使源溶液中的蛋白质结合至固体支持物；以及

(b)从固体支持物洗脱结合的蛋白质。

在一些实施方式中，所述蛋白质是抗体。

在一些实施方式中，在4.0-约6.0的pH下实施接触步骤(步骤(a))并且在约6.1-约8.5的pH下实施洗脱步骤(步骤(b))。

本发明范围内的某些方法包括以下步骤：

(a)在pH4.0-约6.0下，使含有抗体的源溶液接触混合式色谱介质，所述混合式色谱介质包含与固体支持物偶联的配体，配体包含疏水基团以及羧基基团或磺基基团，并且固体支持物具有中值直径为0.5微米或更大的孔而基本没有直径为0.1微米或更小的孔，配体由疏水基团通过1-3个原子的链与固体支持物偶联，以通过配体使源溶液中至少部分抗体与固体支持物结合；并且

(b)在约6.1-约8.5的pH下从固体支持物洗脱结合的抗体。

在一些实施方式中，所述疏水基团是苯基基团，并且在一些实施方式中，所述苯基基团通过含肽连接与酸部分接合。

一些实施方式中，所述配体是苯甲酰氨基乙酸(benzamidoacetic acid)。在一些实施方式中，所述连接是位于苯甲酰氨基乙酸的苯环对位的烷基氨基基团，从而所述配体和连接一起构成对-氨基苯甲酰氨基乙酸基团。

在一些实施方式中，所述固体支持物由中值粒径为约25微米-约150微米的颗粒组成。