[发明专利]一种用于糖蛋白合成的基于原核生物的无细胞系统

权利要求书

1.一种用于生产糖基化蛋白的无细胞系统，所述系统包括：

能够将聚糖由脂质载体分子转移至糖蛋白靶点的分离的寡糖转移酶；

一种或多种分离的聚糖，其中各聚糖均与脂质载体分子连接；以及

糖蛋白靶点，其包括一个或多个聚糖接受体氨基酸残基，或者编码所述糖蛋白靶点的核酸分子。

2.根据权利要求1所述的系统，其中所述寡糖转移酶是原核生物寡糖转移酶。

3.根据权利要求2所述的系统，其中所述原核生物寡糖转移酶来源于弯曲杆菌属(Campylobacter)。

4.根据权利要求1所述的系统，其中所述寡糖转移酶是古生菌寡糖转移酶。

5.根据权利要求1所述的系统，其中所述寡糖转移酶是真核生物寡糖转移酶。

6.根据权利要求1所述的系统，其中所述脂质载体分子包括十一碳二烯磷酸酯。

7.根据权利要求1所述的系统，其中所述一种或多种分离的聚糖包括原核生物聚糖。

8.根据权利要求1所述的系统，其中所述原核生物聚糖包括GlcGalNAc₅Bac。

9.根据权利要求1所述的系统，其中所述一种或多种分离的聚糖包括真核生物聚糖。

10.根据权利要求9所述的系统，其中所述真核生物聚糖包括GlcNAc₂。

11.根据权利要求10所述的系统，其中所述真核生物聚糖进一步包括至少一个甘露糖残基。

12.根据权利要求9所述的系统，其中所述真核生物聚糖包括选自Man₁GlcNAc₂、Man₂GlcNAc₂和Man₃GlcNAc₂的组分。

13.根据权利要求1所述的系统，其中所述糖蛋白靶点的一个或多个聚糖接受体氨基酸残基是天冬酰胺残基。

14.根据权利要求13所述的系统，其中糖蛋白靶点进一步包括N-X₁-S/T或D/E-X₁-N-X₂-S/T(SEQ ID NO:1)聚糖接受体氨基酸序列基序，其中D是天冬氨酸、X₁和X₂是脯氨酸以外的任意氨基酸、N是天冬酰胺和T是苏氨酸。

15.根据权利要求1所述的系统，其进一步包括：适于由所述核酸分子合成糖蛋白靶点的试剂。

16.根据权利要求1所述的系统，其中所述糖蛋白靶点包括抗体。

17.一种试剂盒，包括：

能够将聚糖由脂质载体分子转移至糖蛋白靶点的分离的寡糖转移酶，以及

一种或多种分离的聚糖，其中各聚糖均与脂质载体分子连接。

18.根据权利要求17所述的试剂盒，其进一步包括：

适于由编码所述糖蛋白靶点的核酸分子合成糖蛋白靶点的试剂。

19.一种在无细胞系统中生产糖基化蛋白的方法，所述方法包括：

提供能够将聚糖由脂质载体分子转移至糖蛋白靶点的分离的寡糖转移酶；

提供一种或多种分离的聚糖，其中各聚糖均与脂质载体分子连接；

提供包括一种或多种聚糖接受体氨基酸残基的糖蛋白靶点；

将所述寡糖转移酶、一种或多种分离的聚糖和糖蛋白靶点组合以形成无细胞糖基化反应混合；以及

将所述无细胞糖基化反应混合物置于使寡糖转移酶有效地促使聚糖由脂质载体分子转移至糖蛋白靶点的一个或多个聚糖接受体残基的条件下以产生糖基化蛋白。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述寡糖转移酶是原核生物寡糖转移酶。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述原核生物寡糖转移酶来源于弯曲杆菌属(Campylobacter)。

22.根据权利要求19所述的方法，其中所述寡糖转移酶是古生菌寡糖转移酶。

23.根据权利要求19所述的方法，其中所述寡糖转移酶是真核生物寡糖转移酶。