[发明专利]对反式‑白藜芦醇特异性的抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及针对反式-白藜芦醇的抗体，以及采用这种抗体进行的反式-白藜芦醇的测定。

背景技术

业内对反式-白藜芦醇(tRV)有很大的兴趣。认为饮用红葡萄酒的保健功效大部分归功于反式-白藜芦醇的存在。这些功效包括与食用红葡萄酒相关的心血管心脏病(CVD)的低发病率。另外，对反式-白藜芦醇的潜在抗衰老效果、抗癌效果以及抗糖尿病效果进行了不断的研究。考虑到这些潜在的功效，非常期望生产具有高反式-白藜芦醇水平的食品、饮料和食品补充剂。

尽管在与反式-白藜芦醇相关的数以千计的出版物中均表明对反式-白藜芦醇的高度兴趣及其在酿酒和制药工业中的效果，但是迄今为止用于测量反式-白藜芦醇的唯一方法仍然是高效液相色谱质谱法(HPLC-MS)。虽然HPLC-MS是一种特异且灵敏的测定方法，但是该方法具有明显的限制，主要是由于进行HPLC-MS的设备的成本以及低通过率。例如，尽管葡萄酒的制造商想在生产葡萄酒的各个阶段中都能够评估反式-白藜芦醇的水平，并且还想生产具有高水平的反式-白藜芦醇的葡萄，但是在法国仅有少数的HPLC-MS设施，这就意味着分析是昂贵且缓慢的，从而难以随时间对反式-白藜芦醇进行分析。

发明内容

本发明提供了一种检测和测量tRV的快很多且更便宜的方式。提供的这种方法为用于这种检测的基于抗体的途径。具体地，本发明提供了一种检测或测量样品中反式-白藜芦醇(tRV)的方法，所述方法包括：

(i)使待测试的样品与针对tRV的抗体或该抗体的抗原结合片段相接触；以及

(ii)检测或测量被所述抗体或抗体片段结合的任何tRV。

本发明进一步提供了：

针对tRV的抗体或该抗体的抗原结合片段；

杂交瘤，所述杂交瘤选自：以登记号VKPM H-121保藏的杂交瘤，以登记号VKPM H-122保藏的杂交瘤，以及产生与以登记号VKPM H-121和登记号VKPM H-122保藏的杂交瘤产生的抗体相同的杂交瘤；以及

用于检测或测量反式-白藜芦醇(tRV)的试剂盒，其中，所述试剂盒包括所述抗体或抗体片段。

附图说明

图1示出了在生成抗-tRV抗体中使用的tRV偶联物的合成。

图2示出了利用布鲁克(Bruker)AM300，tRV在300MHz下、在DMSO-d₆中的¹Н-NMR谱图。

图3示出了1-tRV在乙腈(0.0004mg/ml)中的吸收谱图；2-RV-BSA偶联物(9)在水中的吸收谱图；以及3-BSA在水(1mg/ml)中的吸收谱图。

图4示出了来自小鼠#1的血清、RV-BSA(用于免疫的抗原)、OVA-卵清蛋白、具有OVA的tRV的RV-OVA-偶联物的滴度。

图5示出了测量来自小鼠#1血清的针对tRV抗体的竞争分析的结果。

图6示出了通过使用来自杂交瘤2Н9和杂交瘤1В1的单克隆抗体进行的tRV竞争分析的结果。

图7示出了校准曲线样品中tRV浓度与К_in的关系曲线。

图8示出了在实施例6中提到的t-RSV半抗原合成示意图。

图9示出了在实施例6中提到的酯2在CDCI₃中的¹H NMR谱图(A)和酸3在CDCI₃中的¹H NMR谱图(B)。

图10示出了在注射有实施例6中所述的t-RSV-BSA偶联物的Balb/c小鼠中的免疫应答。

具体实施方式

应当理解地是，所公开的方法的不同应用可根据本领域中的具体需要而进行调整。还应当理解地是，本文中所使用的术语仅用于描述本发明的具体实施方式的目的，并不用于限制。此外，在本说明书和所附权利要求书中，单数形式“一(a)”、“一(an)”以及“该(the)”包括复数形式，除非上下文另有清楚地限定。因此，例如，“一种化合物”包括“多种化合物”；“一种多肽”，包括两种或更多种这种多肽等。无论是上文还是下文，本文所引用的所有出版物、专利和专利申请均通过引用而整体并入本文中。当本文中使用术语“包括”时，本发明还提供了“由特定成分组成”或“基本由特定成分组成”的实施方式。